熒光原位雜交技術檢測宮頸脫落細胞C-MYC基因擴增的臨床研究.pdf

1、子宮頸癌(CervicalCancer，CC)是世界上嚴重威脅婦女健康的主要惡性腫瘤之一，發(fā)病率居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的第二位。全世界每年約有47萬宮頸癌新增病例，我國每年大約有10萬子宮頸癌新發(fā)病例；我國子宮頸癌年調整死亡率為4.3/10萬，其中山西省的部分高發(fā)地區(qū)可達36.0/10萬，并且有發(fā)病年輕化的趨勢。已經證實由高危型人乳頭狀瘤病毒（highriskhumanpapillomavirus，HR-HPV）持續(xù)感染啟動，同時伴隨其

2、他因素，經由子宮頸的不典型增生（輕-中-重度）、原位癌、早期浸潤癌直至發(fā)展成子宮頸浸潤癌。流行病學研究表明子宮頸癌早期治療后5年生存率接近100％，而晚期治療5年生存率僅為20％～50％。因此，針對宮頸癌及其癌前期病變的篩查和早期診斷尤為重要。
　　 目前宮頸癌篩查的方法多采用宮頸脫落細胞檢查及HPV檢測。研究發(fā)現，傳統(tǒng)巴氏細胞學檢查的特異性可高達90％以上，但由于取材不全面、涂片不均勻、細胞丟失多、過多的血液或細胞學診斷醫(yī)師的

3、主觀偏倚等諸多方面的不足，其敏感性一般只在55％～80％左右。二十世紀九十年代發(fā)明的液基細胞學檢測技術雖改變了常規(guī)涂片的操作方法，但在發(fā)現高級別CIN方面，不論是敏感性還是特異性均無顯著提高。目前已公認，HPV感染是宮頸癌發(fā)生的必要條件，HPV檢測具有宮頸癌篩查的潛在作用。與細胞學檢查相比，HPVDNA檢測CINⅡ以上病變敏感性更高，可達95％，但特異性較低，為70％左右。多數HPV陽性的病人在一年左右就會轉陰，意味著除了HPV感染外還

4、有其他的機制在子宮頸癌發(fā)生與進展中發(fā)揮著作用。因而，從宮頸癌篩查及早期診斷角度出發(fā)，迫切需要其它可靠指標或手段來協助以上檢測手段進行綜合判斷，使宮頸癌的早期篩查更準確、更可靠，更有預見性。
　　 近幾年分子遺傳學研究在尋找預防、早期診斷及有效的治療宮頸癌及癌前病變的方法中起到了重要作用，發(fā)現原癌基因在基因或蛋白水平上的改變致使細胞腫瘤轉變并損害細胞生長調控機制，從而引起腫瘤形成。其中C-MYC基因被證實是一種與腫瘤高度相關的細胞

5、癌基因。C-MYC基因定位于8q24區(qū)，在宮頸癌及癌前病變組織中經常發(fā)現C-MYC基因的擴增和過度表達，該基因擴增異常，提示可能已經存在宮頸癌前病變，甚至是宮頸癌。因此，C-MYC基因的異常擴增可能是宮頸癌形成的早期事件。Sokolova應用熒光原位雜交技術(FISH)發(fā)現子宮頸癌及癌前病變患者存在C-MYC基因的擴增，并且隨著病變程度加重而升高：表明C-MYC基因擴增的情況與宮頸癌及癌前病變的病情發(fā)展程度密切相關。因此，對C-MYC基

6、因擴增情況的檢測可能有助于子宮頸癌及癌前病變的早期診斷。熒光原位雜交技術（fluorescentinsituhybridization，FISH）為目前檢測這一基因擴增的標準方法，具有特異性強、敏感性高、定位精確、可定量、穩(wěn)定性好、無創(chuàng)等特點。故而應用FISH技術檢測C-MYC基因的擴增情況在一定程度上彌補了現行宮頸癌和癌前病變篩查及早期診斷方法的局限性，有望成為臨床宮頸疾病篩查和早期診斷中一項重要的輔助檢查。
　　 目的：

7、r>　　 本研究采用熒光原位雜交技術(FISH)檢測不同程度宮頸病變中宮頸脫落細胞C-MYC基因的擴增情況，與細胞學、HPV感染情況及病理學金標準進行比較，評估C-MYC基因檢測對宮頸癌及癌前病變篩查及早期診斷的臨床意義。
　　 方法：
　　 選擇2011年9月-2012年3月山西醫(yī)科大學第二醫(yī)院婦產科門診自愿接受宮頸篩查者或入院接受治療者在進行治療前檢查的住院患者共140例。每一位研究對象均進行細胞學、HPVDNA、

8、C-MYC基因檢測和陰道鏡組織病理學檢查。根據檢查結果，將140名研究對象按細胞學分為Norm/infla、ASCUS、LSIL、HSIL及SCC組；按組織病理學分為正常、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宮頸癌組。細胞學采用新柏氏液基細胞學檢測，HPVDNA采用凱普HPV基因分型檢測，C-MYC基因采用熒光原位雜交技術檢測。統(tǒng)計學分析使用SPSS17.0統(tǒng)計軟件，采用X2檢驗，設立檢驗水準為α=0.05，P＜0.05認為差異具有統(tǒng)計學意義

9、。以組織病理診斷為金標準，用靈敏度、特異度、假陰性率、假陽性率、陽性似然比、陰性似然比及Kappa系數評價三種檢測方法在宮頸病變中的診斷價值。
　　 結果：
　　 1.根據細胞學分組，C-MYC基因在Norm/lnfla組、ASCUS組、LSIL組、HSIL組及SCC組的擴增率分別為0.0％、20.9％、45.0％、64.5％、93.8％。各組間差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。
　　 2.根據組織學分組，C

10、-MYC基因在正常組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組及宮頸癌組的擴增率分別為2.6％、11.5％、44.4％、71.0％、83.3％。各組間差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。
　　 3.宮頸病變程度越高，C-MYC基因陽性表達的異常細胞數目越多，核型表現越復雜。正常宮頸組織C-MYC基因陽性表達的異常細胞數目為0～5，基因擴增數量為3；低度病變(CINⅠ)異常細胞數目為0～7，基因擴增數量為3～4；高級別病變(≥CINⅡ

11、)異常細胞數目為2～32，基因擴增數量為3～8。
　　 4.三種檢測方法的靈敏度、特異度、假陰性率、假陽性率、陽性似然比、陰性似然分別為：細胞學(72.3％、81.3％、27.7％、18.7％、3.87、0.34)、HPVDNA(92.1％、57.8％、7.9％、42.2％、2.18、0.14)、C-MYC基因(64.5％、93.8％、35.5％、6.2％、10.4、0.38)。3種診斷方法的靈敏度、特異度比較，差異具有統(tǒng)計學意

12、義(P=0.000)。
　　 5.應用Kappa系數分析C-MYC基因檢測與細胞學及HPVDNA檢測的吻合情況，結果顯示經加權后Kappa系數分別為0.538和0.399，P均為0.000。這三種方法有一定的吻合度，但吻合度一般。
　　 結論：
　　 1.隨著宮頸病變級別的增高，C-MYC基因的擴增率也明顯增加，且高級別病變基因陽性擴增率著高于低級別病變，C-MYC基因的擴增與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關。