c-jun氨基末端激酶在蛛網膜下腔出血后癥狀性腦血管痙攣中作用及機制的實驗研究.pdf

1、第一部分：實驗性蛛網膜下腔出血后兔腦血管痙攣模型的基底動脈病理改變 目的:建立兔頸動脈結扎后枕大池穿刺二次注血后的蛛網膜下腔出血模型，觀察其神經行為學和基底動脈的病理學改變。方法:l采用右側頸動脈結扎后枕大池二次注血的方法(兩次注血時間間隔為48小時)制成兔蛛網膜下腔出血(SAH)模型。實驗30只兔隨機分為5組，即結扎右側頸動脈后枕大池二次注射生理鹽水組作為對照組、結扎后枕大池二次注血組(SAH3d組、SAH7d組、SAH10d

2、組、SAH14d組)，每組6只。觀察并比較各組實驗動物神經行為學改變、對各組腦組織大體標本的觀察、利用光鏡、電鏡對基底動脈形態(tài)學觀察以及TUNEL染色技術觀察血管內皮細胞的凋亡、免疫組化法檢測P—JNK及Caspase-3蛋白表達。結果:神經行為學檢測：對照組在注射生理鹽水前后無明顯變化，SAH組均出現(xiàn)了神經行為學的改變，且持續(xù)時間較長。通過光鏡和透射電鏡檢查及橫截面積測量顯示出血后3d出現(xiàn)血管管腔狹窄、橫截面積減小、管壁增厚、內皮細胞

3、變性，并隨時間推移加重，尤以7d為著，10d后緩解。基底動脈血管內皮細胞磷酸化JNK(P—JNK)在SAH后3d即呈陽性表達，7d最為明顯，10d后逐漸下降。SAH組基底動脈壁出現(xiàn)胞漿濃縮、核染色質濃縮邊集等凋亡樣改變、較多血管內皮細胞TUNEL染色陽性，同時內皮細胞中Caspase-3蛋白表達上調，而對照組無明顯上述表現(xiàn)，結果提示本實驗建立的癥狀性腦血管痙攣(cerebralvasospas—m，CVS)模型為較可靠的動物模型，與文獻

4、報道一致。結論:1．本實驗制作的癥狀性CVS模型，在二次注血后均出現(xiàn)神經行為學改變，大多于2d后緩解，漸恢復正常。血管痙攣在注血后3d開始，7d到達高峰，10d后逐漸緩解。實驗結果提示此模型較為滿意地模擬了臨床上SAH后癥狀性CVS的病理生理變化。2．SAH后血管內皮細胞P—JNK表達上調，胞漿Caspase-3呈陽性表達，基底動脈的血管內皮TUNEL染色陽性細胞明顯增多，并且其活化水平在時程上的改變與基底動脈病理生理變化密切相關，提示

5、JNK介導的細胞凋亡可能在CVS的形成和發(fā)展中起到一定的作用。 第二部分JNK抑制劑對蛛網膜下腔出血后癥狀性腦血管痙攣的影響 目的/:研究JNK特異性抑制劑—SP600125對SAH后癥狀性CVS的影響，以探討蛛網膜下腔出血后CVS細胞信號轉導通路機制。方法:24只兔隨機分為對照組(枕大池注入生理鹽水)、SAH(7d)組、DMSO組(SAH+載體dimethylsulfoxideDMSO)和SP600125組(SAH+S

6、P600125)，每組6只，右側頸動脈結扎后枕大池二次注血的方法建立兔癥狀性CVS模型。應用光鏡、透射電鏡、免疫組化等方法檢測各組動物基底動脈形態(tài)的變化，及使用SP600125干預后對上述表達的影響。結果:和對照組比較SAH組及DMSO組基底動脈管腔明顯狹窄；P—JNK檢測見大量棕黃色的陽性細胞；血管內皮細胞中Caspase-3蛋白表達上調；TUNEL染色陽性內皮細胞較多；SAH組和DMSO組之間無明顯差異。應用JNK特異性抑制劑的SP

7、600125組動物腦基底動脈狹窄改善，Caspase-3以及TUNEL染色陽性內皮細胞與SAH組或DMSO組相比下降，有顯著差異(P＜0.05)，同時病理檢查顯示基底動脈管壁增厚、內皮細胞凋亡樣改變減輕，對照組與SP600125組比較差異不明顯。結論:1．JNK特異性抑制劑—SP600125能減輕實驗動物的神經行為學癥狀，明顯緩解SAH后腦血管痙攣，使Caspase-3以及內皮細胞TUNEL染色陽性細胞減少，凋亡樣改變減輕。2．進一步證