平邑甜茶MhMAPK基因的分離、功能鑒定及其信號轉導作用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、促分裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase，MAPK)是MAPK級聯(lián)信號轉導途徑中的關鍵酶，在植物生長發(fā)育和脅迫信號傳遞中起重要作用。平邑甜茶(Malus hupehensis (Pamp)Rehd.var pinyiensisJiang)是蘋果常用砧木，本文以平邑甜茶為試材，克隆了MAPK基因全長、分析了其基因序列與編碼蛋白，還研究了脅迫下MAPK基因表達與蛋白活性，主要結果如下：

2、1.利用RT-PCR技術結合RACE技術獲得了平邑甜茶MAPK基因，命名為MhMAPK。GenBank注冊號為EF427897。 2.MhMAPK編碼的蛋白質(zhì)特性分析表明，該蛋白具有MAPK蛋白的典型結構，即含有11個保守的蛋白激酶亞區(qū)，在第Ⅶ和第Ⅷ個亞區(qū)之間有一個非常保守的TxY基序，并且含有蛋白激酶所具有的結構域。 3.構建了pBIN-GFP-MhMAPK表達載體并使其在洋蔥表皮中表達，結果表明，MhMAPK定位在細

3、胞核內(nèi)，同時利用ProtComp Version 6.1軟件分析的結果也表明該蛋白定位于細胞核內(nèi)。 4.構建了pBI121-MhMAPK正義表達載體并轉化農(nóng)桿菌LBA4404，并對煙草進行了農(nóng)桿菌侵染，獲得了轉基因煙草植株。此外，還構建了pBI121-3’segment反義表達載體，從而為轉反義基因提供了基礎。 5.鹽脅迫、干旱脅迫、CdCl2和CuCl2脅迫以及SNP(NO供體)均能顯著提高MhMAPK基因的表達量，并

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