ANKH基因與強直性脊柱炎異位骨化的相關性研究.pdf

1、本文從以下幾部分進行論述：
　　第一部分 AS患者與脊柱損傷患者的韌帶組織在成骨礦化程度和ANKH基因含量間的比較
　　目的：比較AS實驗組與JK對照組韌帶組織間的成骨礦化差異。探討ANKH是否參與了AS異位骨化的形成。
　　方法：分別取AS韌帶做實驗組，脊柱損傷患者的韌帶組織做正常對照組，利用HE染色、茜素紅染色和馮庫薩染色觀察各組織的大體形態(tài)和礦化程度。同時行免疫組織化學技術對ANKH的表達進行定位分析，以及行RT

2、-PCR技術檢測兩組織間ANKH表達是否存在差異。
　　結(jié)果：兩種組織HE染色均可見含有較大量的成纖維細胞，且細胞形態(tài)未見明顯差異。茜素紅染色和馮庫薩染色結(jié)果顯示AS關節(jié)韌帶附著端有明顯的礦化，而正常人未見礦化。免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)ANKH主要定位在細胞膜，且其在韌帶成纖維細胞中有較高表達。RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn):ANKH基因在AS實驗組與JK對照組間有明顯差異，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論：AS患者韌帶異位骨化

3、起始于關節(jié)韌帶附著點處，且韌帶骨化組織間存在較大量的成纖維細胞。AS患者的韌帶組織中ANKH表達較少，ANKH基因可能在AS患者韌帶組織的異位成骨過程中起到重要作用。
　　第二部分 原代成纖維細胞的培養(yǎng)及兩種組織的成纖維細胞間成骨礦化能力和ANKH基因含量的比較
　　目的：掌握簡單高效的原代培養(yǎng)成纖維細胞的方法。比較兩組成纖維細胞間的成骨礦化能力，研究ANKH基因是否參與了AS異位骨化的形成及其可能的參與機制。
　　方

4、法：兩組韌帶組織的原代成纖維細胞均采用組織塊貼壁法培養(yǎng)獲得，并鏡下觀察兩組原代細胞的形態(tài)。取第三代細胞行免疫熒光技術鑒定成纖維細胞的含量。分別取兩組的第三代成纖維細胞進行礦化誘導培養(yǎng)，并通過檢測ALP活力變化及茜素紅染色來對比兩組成纖維細胞成骨分化、礦化能力的大小。同時行RT-PCR檢測兩組韌帶成纖維細胞間ANKH表達是否存在差異。
　　結(jié)果：通過組織塊貼壁培養(yǎng)法成功培養(yǎng)出韌帶成纖維細胞，鏡下觀察細胞形態(tài)未見差異，經(jīng)波形蛋白免疫熒

5、光鑒定成纖維細胞含量在99％以上。堿性磷酸酶(ALP)活性檢測及茜素紅染色結(jié)果均顯示，兩組細的胞外ALP分泌均增加，并形成一定數(shù)量的礦化小結(jié)節(jié)，但AS實驗組的胞外ALP分泌量及礦化小結(jié)節(jié)數(shù)量均較JK對照組高，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)，AS患者韌帶成纖維細胞ANKH基因表達明顯少于JK對照組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論：組織塊貼壁培養(yǎng)法可以簡單高效的培養(yǎng)出高純度的韌帶成纖維細胞，韌