姜黃素對高糖誘導的H9C2心肌細胞炎癥的保護作用及機制研究.pdf

1、目的：
　　1、觀察高糖對H9C2心肌細胞生物活性的影響。
　　2、觀察姜黃素對高糖誘導的H9C2心肌細胞的生物活性、炎癥反應的影響。
　　3、探討姜黃素抑制高糖誘導的H9C2心肌細胞炎癥反應的機制。
　　方法：
　　1、體外正常糖培養(yǎng)H9C2心肌細胞，再分別用高糖、姜黃素、肝X激動劑/抑制劑、TLR抑制劑、PP2A抑制劑進行干預。
　　2、實驗分組：①Control組：正常對照組，用正常糖培養(yǎng)基（5

2、.5mmol/L）培養(yǎng)H9C2細胞；②HG組：陽性對照組，用高糖培養(yǎng)基（33mmol/L）培養(yǎng)H9C2細胞；③HG+T0901317組：對HG組用肝X激動劑（T0901317終濃度20μmol/L）進行干預；④HG+TAK-242組：對HG組用TLR抑制劑（TAK-242終濃度100nmol/L）進行干預；⑤HG+Curcumin組：對HG組用姜黃素（Curcumin終濃度10μmol/L）進行干預；⑥HG+5CPPSS-50組：對HG

3、組用肝X抑制劑（5CPPSS-50終濃度15μmol/L）進行干預；⑦HG+5CPPSS-50+Curcumin組：在HG+5CPPSS-50組的基礎上加用Curcumin進行干預；⑧HG+Okadaic acid組：對HG組用PP2A抑制劑（Okadaic acid終濃度20nmol/L）進行干預；⑨HG+Okadaic acid+Curcumin組：在HG+Okadaic acid組的基礎上加用Curcumin進行干預。
　　

4、3、相應組中加入相應藥物干預72h后，用CCK-8檢測各組H9C2心肌細胞的生長狀況；ELISA試劑盒測各組炎癥因子（IL6、TNFα、MCP1）分泌量；同時應用qRT-PCR檢測各組LXRα、IRAK4、PP2AcmRNA水平；Western blot檢測各組NF-κB p65(總量和核內(nèi))、LXRα、IRAK4、p-PP2Ac蛋白的表達并比較。
　　結果：
　　1、CCK-8檢測各組H9C2心肌細胞的生長狀況結果顯示：高

5、糖可使細胞增殖活力下降，LXRs激動劑、TLR抑制劑、姜黃素可以減輕高糖對H9C2心肌細胞增殖活力的抑制，而LXRs抑制劑或PP2A抑制劑干預后細胞增殖活力抑制加劇。在LXRs抑制劑或PP2A抑制劑干預的基礎上使用姜黃素不能改善高糖對H9C2心肌細胞增殖活力的抑制。
　　2、ELISA法檢測各組細胞上清中炎癥因子（IL6、TNFα、MCP1）的分泌量，結果表明：高糖作用下細胞培養(yǎng)上清中炎癥因子含量明顯增高（P<0.05）。T090

6、1317、TAK-242、Curcumin干預后炎癥因子分泌量減少（P<0.05）。5CPPSS-50或Okadaic acid加劇炎癥因子釋放（P<0.05）。相對HG+Curcumin組，在LXRs抑制劑或PP2A抑制劑干預的基礎上使用Curcumin不能降低炎癥因子含量（P<0.05）。
　　3、qRT-PCR檢測各組LXRα、IRAK4、PP2Ac mRNA水平：高糖可使LXRαmRNA水平輕微上升，但無統(tǒng)計學差異（P>0

7、.05），而IRAK4和PP2Ac mRNA明顯上調(diào)（P<0.01）。與 HG組相比：HG+T0901317組、HG+TAK-242組、HG+Curcumin組LXRα mRNA進一步上調(diào)（P<0.01），IRAK4 mRNA則明顯下降（P<0.01）；HG+5CPPSS-50組結果提示LXRα mRNA明顯受到抑制（P<0.01），IRAK4 mRNA進一步上調(diào)（P<0.01）。在LXRs抑制劑干預的基礎上使用Curcumin不能發(fā)揮

8、Curcumin上調(diào)LXRα mRNA水平的作用。另外與HG組相比還表明：PP2A抑制劑干預將進一步明顯上調(diào)PP2Ac mRNA水平（P<0.01），Curcumin干預則可以明顯下調(diào)PP2Ac mRNA水平（P<0.01），而在PP2A抑制劑干預的基礎上使用Curcumin將明顯減弱Curcumin下調(diào)PP2Ac mRNA水平的作用。
　　4、Western blot檢測各組NF-κB p65(總蛋白和核內(nèi)組分)、LXRα、IR

9、AK4、p-PP2Ac蛋白的表達結果：各組NF-κB p65總蛋白表達無明顯差異（P>0.05）。高糖可使LXRα蛋白表達水平輕微上升，但無統(tǒng)計學差異（P>0.05），而胞核內(nèi)NF-κB p65、IRAK4和p-PP2Ac蛋白表達明顯上調(diào)（P<0.01）。與HG組相比：HG+T0901317組、HG+TAK-242組、HG+Curcumin組LXRα蛋白表達則進一步上調(diào)（P<0.05），IRAK4蛋白和胞核內(nèi)NF-κB p65蛋白表達則

10、明顯下降（P<0.05）；HG+5CPPSS-50組結果提示LXRα蛋白表達受到抑制（P<0.05），IRAK4蛋白和胞核內(nèi)NF-κB p65蛋白表達進一步上調(diào)（P<0.01）。在LXRs抑制劑干預的基礎上使用Curcumin不能發(fā)揮Curcumin上調(diào)LXRα蛋白表達、抑制NF-κB p65入核的作用。另外，與 HG組相比較還表明：PP2A抑制劑干預將進一步上調(diào)p-PP2Ac、胞核內(nèi)NF-κB p65蛋白含量（P<0.05），Curc

11、umin干預則可以明顯下調(diào)p-PP2Ac蛋白表達（P<0.01），而在PP2A抑制劑干預的基礎上使用Curcumin將明顯減弱Curcumin下調(diào)p-PP2Ac表達、抑制NF-κB p65入核的作用。
　　結論：
　　1、高糖可誘導H9C2心肌細胞發(fā)生炎癥反應，姜黃素可以抑制高糖誘導的H9C2心肌細胞炎癥反應。
　　2、姜黃素能夠上調(diào)LXRα表達，還可以抑制IRAK4、p-PP2Ac表達，活化PP2A負性調(diào)控TLR-N