高爾基體磷酸蛋白2應對炎癥以及肝損傷的生理功能研究.pdf

1、高爾基體磷酸蛋白2(GOLPH2，GP73）是的一個功能未知的高爾基體二型跨膜蛋白，定位在高爾基體順面，并能夠通過細胞內(nèi)膜系統(tǒng)轉(zhuǎn)運分泌到細胞外基質(zhì)。臨床和病理研究表明，GOLPH2與疾病關系密切，尤其在肝炎肝癌和肝炎患者中發(fā)現(xiàn)有GOLPH2異常高表達，并且能夠分泌到血液，從而可能作為臨床診斷肝癌的血清學標志物。目前關于GOLPH2 異常表達的研究主要集中在臨床研究方面，而針對GOLPH2在肝炎和肝損傷中異常表達的細胞和分子機制研究較少，

2、這限制了GOLPH2在臨床上的應用和價值。
　　 本研究主要應用動物和細胞模型，研究GOLPH2在肝炎和肝損傷過程中異常表達的過程和部分機制，并初步探討了GOLPH2異常表達的意義。應用肝炎動物模型和肝損傷動物模型，可以跟蹤肝炎和肝損傷的發(fā)生和進展過程。研究發(fā)現(xiàn)GOLPH2 對肝炎和肝損傷的反應非常迅速和靈敏，肝臟受到LPS 或者CCl4 刺激后24h 內(nèi)，GOLPH2表達水平就迅速升高，并在損傷后48h，達到高峰；同時肝炎以及

3、肝損傷修復進入尾聲時，GOLPH2 水平緩慢下降，GOLPH2 水平的下降可能還與愈后相關。GOLPH2 在肝臟炎癥反應中的異常表達可能是炎癥因子（細胞因子）的調(diào)節(jié)結果，使用細胞因子體外刺激小鼠原代肝細胞以及肝癌細胞系Hep3B 細胞，檢測GOLPH2表達。結果顯示IL-1b以及IL-6 有上調(diào)GOLPH2的作用，而TGF-b能夠顯著下調(diào)肝細胞GOLPH2表達水平；沒有檢測到TNF-a以及IFN-r 對GOLPH2的調(diào)節(jié)效果。這部分研究

4、結果表明GOLPH2 可能與肝炎過程中免疫細胞分泌的IL-1b、IL-6表達水平升高相關。為了進一步研究GOLPH2 在肝炎中表達是否存在生理意義，我們第一次構建和使用了GOLPH2基因敲除鼠模型，使用Cre-Loxp系統(tǒng)敲除GOLPH2基因外顯子5，結果顯示GOLPH2 存在一種尚未發(fā)現(xiàn)的新的可變剪接方式，外顯子6的5'端存在2個剪接位點，使得GOLPH2 可以選擇兩個不同的位置連接外顯子6，屬于可變剪接中的可變3'端剪接方式。由于事