沒食子酸通過大鼠GST促進鹵代芳香烴類毒物的代謝.pdf

1、目的:誤食水果和蔬菜中殘留農藥對人體帶來的毒害作用嚴重影響著人民的身體健康。近年來，如何解除鹵代芳香烴類農藥的毒副作用的研究倍受關注。正常機體內谷胱甘肽硫轉移酶(GST)能催化機體內鹵代芳香烴類毒物與還原性谷胱甘肽(GSH)發(fā)生結合反應，增加水溶性而排出體外發(fā)揮解毒的功效。任何增加體內酶活性的因素均有利于促進毒物的代謝排出。葡萄、茶葉等果蔬品種富含沒食子酸，有文獻報道沒食子酸具有針對有機毒物的解毒作用，但解毒機制不明確，相關的研究報道較

2、少。本文從體內、體外代謝酶動力學研究這一新的視角出發(fā)，以大鼠為研究對象，探索沒食子酸是否能夠通過影響機體內解毒酶(GST)的活性，從而改變體內鹵代芳香烴類毒物的代謝速率，揭示其解毒排毒分子機制，為保障人們健康飲食，增強體質，提升機體解毒排毒的能力提供重要的理論指導。
　　方法:首先建立體外鼠肝微粒體中GST評價的孵育體系及酶活性測定HPLC分析方法，求算Vmax、Km及代謝清除率(CLint)等動力學參數(shù)，用于分析沒食子酸對GST

3、酶的動力學的影響，并對相關分子機制進行研究。通過IC50(.)Ki等參數(shù)評價沒食子酸對以1-氯-2，4-二硝基苯(CDNB)為代表的毒物的體外代謝的影響，初步判斷二者發(fā)生相互作用的模式為體內實驗奠定基礎。其次建立大鼠體內藥物代謝評價體系，創(chuàng)建以DCNB為探針底物測定血藥濃度的氣相色譜分析方法，通過DAS3.2.1繪制DCNB的藥時曲線并計算其動力學參數(shù)，用于分析沒食子酸對體內鹵代芳香烴類毒物的代謝的影響。為了進一步探查沒食子酸在大鼠體內

4、對GST的綜合影響，采用Western Blot方法考察了肝、腎、腸中mGST-1的蛋白表達，以期全面分析評價沒食子酸在體內對GST的整體影響結果。
　　結果:大鼠肝微粒體GST的體外動力學分析顯示，GST酶的Vmax為85.45 nmol·min-1·mg protein-1; Km為15.09μmol·L-1;Clint為5.66 mL·min-1·mg protein-1。沒食子酸在體外明顯存在非時間依賴性抑制GST酶活性(

5、IC50=14.79μM)。經(jīng)超速離心和加入10Km的CDNB后，酶活性得到恢復，Ki為9.49μM。表明在體外沒食子酸是GST中等強度抑制劑，屬于可逆性抑制中的混合型機制。顯示可能存在降低CDNB等毒物的代謝作用。體內實驗表明，沒食子酸干預的實驗組與對照組相比AUC0-∞從10363.5±1945.6降低到7075.1±1433.2。而實驗組CL/F(14.1±3.4)明顯高于對照組（9.6±2.3）。在蛋白表達分析實驗中，沒食子酸干

6、預的實驗組中肝、腎、腸的GST蛋白表達明顯強于對照組。
　　結論:本文首次從Ⅱ相代謝酶的動力學分析角度，考察了沒食子酸通過對GST酶動力學的影響而發(fā)揮其對鹵代芳香烴類農藥的解毒機制。揭示了沒食子酸在體外雖然具有對GST的抑制作用，但在大鼠體內其可以在各器官中通過大量誘導GST表達，增加體內酶的絕對含量達到促進對鹵代芳香烴類農藥的代謝清除效果。從而有效發(fā)揮沒食子酸解毒作用。提示日常生活中多食用富含沒食子酸的食物能有效加快肌體對農藥殘