珠子參皂苷聯(lián)合5-FU對人宮頸癌caski細胞的作用研究.pdf

1、　　目的：探討珠子參皂苷(PJ)單獨及其與5-氟尿嘧啶(5-FU)聯(lián)合應用對人宮頸癌caski細胞誘導其凋亡的作用,為臨床上聯(lián)合應用珠子參皂苷和5-FU治療宮頸癌提供實驗依據(jù)。
　　方法：(1) 取珠子參生藥材,以醇提法制備珠子參皂苷粉末。(2) 體外培養(yǎng)人頸鱗癌Caski細胞系細胞,用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測不同濃度的5-FU、珠子參以及合用在作用24、48及72h對caski細胞增殖的影響以及倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)

2、的變化。(3) 選擇適宜濃度的PJ 、5-FU及PJ與5-FU的合用組作用于Caski細胞,電鏡下觀察caski細胞形態(tài)的變化。(4) qPCR檢測不同藥物處理后抑癌基因p53,p21與癌基因c-myc,c-fos的表達情況。(5) Western blot檢測PJ 、5-FU及PJ與5-FU的合用處理后p53,p21蛋白及c-myc,c-fos蛋白的表達情況。
　　結果：(1) MTT比色法顯示：PJ能抑制caski細胞的增殖

3、,PJ和5-FU合用能增強單藥對caski細胞的增殖抑制作用。(2) 通過透射電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)：PJ 可明顯抑制宮頸癌 caski 細胞的生長,細胞出現(xiàn)細胞膜微絨毛減少或消失,細胞活躍度明顯下降,細胞內出現(xiàn)凋亡小體,PJ與5-FU合用組抑制caski細胞生長作用最明顯,凋亡細胞增多,出現(xiàn)凋亡晚期的蟹爪狀細胞,整體凋亡細胞比例增加。(3) qPCR法結果顯示：PJ可上調抑癌基因p53,p21的表達,下調癌基因c-myc,c-fos的表達

4、；與5-FU組相比,PJ和5-FU合用組在上調抑癌基因p53,p21的表達,下調癌基因c-myc,c-fos表達的作用更加明顯。(4)Western blot結果表明：PJ可上調p53蛋白的表達,顯著上調p21蛋白的表達,顯著下調c-myc,c-fos蛋白的表達；與5-FU組相比,PJ和5-FU合用組在上調p53,p21蛋白,下調c-myc,c-fos蛋白表達上的作用更加明顯。
　　結論：本實驗所選用劑量的PJ對人宮頸癌cask

5、i細胞有明顯抑制增殖的作用,進一步證明了PJ在體外可抑制腫瘤細胞生長。PJ與5-FU合用能增強5-FU對caski細胞的增殖抑制作用,PJ與5-FU合用可誘導人宮頸癌caski細胞的凋亡,表明PJ可增強5-FU對人宮頸癌的抑制作用及誘導凋亡的作用。PJ與5-FU合用可能通過影響caski細胞DNA合成,改變細胞周期時相分布、誘導凋亡發(fā)揮抑制細胞增殖作用,其分子機制可能與上調p53,p21的表達,下調c-myc,c-fos的表達有關。本研