脊髓TLR4-p38MAPK-TNF-α信號通路在SMIR持續(xù)性術后痛中的作用.pdf

1、目的：研究脊髓TLR4/p38MAPK/TNF-a信號通路在大鼠SMIR持續(xù)性術后痛中的作用。
　　方法：(1)選擇鞘內置管成功的雄性SD大鼠96只，隨機分為4組(n=24)：假手術組、皮膚肌肉切口牽拉模型組(SMIR組)、SMLR+鞘內陰性對照siRNA組(scramble siRNA組)和SMIR+鞘內TLR4siRNA組(TLR4siRNA組)。假手術組和SMIR組于術前1d和術后1-6d鞘內注射人工腦脊液(ACSF)20μ

2、l，1次/d；scramblesiRNA組和TLR4siRNA組于術前1d和米后1-6d分別鞘內注射scramble siRNA(2μg/10μl)和TLR4siRNA(2μg/10μl)，1次/d并在每次注藥后經導管注射ACSF10μg沖洗導管。(2)選擇鞘內置管成功的雄性SD大鼠120只，隨機分為5組(n=24)：假手術組、SMIR組、SMIR+鞘內DMSO溶媒劑組(DMSO組)、SMIR+鞘內SB203580組(SB203580組

3、)和SMIR+鞘內TLR4siRNA組(TLR4siRNA組)。假手術組和SMIR組于術前30min和術后1-12d鞘內注射ACSF20μl，1次/d；DMSO組和SB203580組于術前30min和術后1-12d分別鞘內注射SB203580(5μg/10μl)和DMSO(2％，10μl)，TLR4siRNA組于術前1d和術后1-12d鞘內注射TLR4siRNA(2μg/10μl)，1次/d，并在每次注藥后經導管注射ACSF10μl沖洗

4、導管。(3)選擇鞘內置管成功的雄性SD大鼠120只，隨機分為5組(n=24)：假手術組、SMIR組、SMIR+鞘內TLR4siRNA組(TLR4siRNA組)、SMIR+鞘內SB203580組(SB203580組)和SMIR+鞘內rhTNFR：Fc組(rh TNFR：Fc組)。假手術組和SMIR組于術前1d和術后1-12d鞘內注射ACSF20μl，1次/d；TLR4siRNA組和rh TNFR：Fc組于術前1d和術后1-12d分別鞘內注

5、射TLR4siRNA(2μg/10μl)和rh TNFR：Fc(50μg/10μl)，SB203580組于術前30min和術后1-12d鞘內注射SB203580(5μg/10μl)，1次/d，并在每次注藥后經導管注射ACSF10μl沖洗導管。采用Flatters法建立大鼠SMIR持續(xù)性術后痛模型；于術前1d及術后第1d、3d、7d、12d和22d測定機械縮足反應閾值(MWT)；采用western印跡法(Western blotting)

6、檢測脊髓TLR4、p-p38MAPK蛋白表達的變化；采用ELISA法觀察大鼠脊髓TNF-a含量的變化；應用免疫熒光組織化學染色方法觀察脊髓TLR4與小膠質細胞活化標記物Iba1表達情況。
　　結果：(1)與術前及假手術組比較，SMIR組和scramble siRNA組大鼠術后第3d、7d、12d和22d MWT明顯降低(P<0.05)；術后第3d、7d、12d脊髓TLR4蛋白表達明顯增加(P<0.05)；與SMIR組比較，TLR4

7、siRNA組術后第3d、7d和12d MWT明顯升高(P<0.05)，術后第3d、7d和12d脊髓TLR4蛋白表達明顯降低(P<0.05)；免疫熒光組織化學雙標染色顯示脊髓小膠質細胞活化標記物Iba1和TLR4共表達。
　　(2)與術前基礎值及假手術組比較，SMIR組和DMSO組大鼠在術后第3d、7d、12d和22d MWT明顯降低(P<0.05)，術后第7d、12d和22d脊髓p-p38MAPK蛋白表達明顯增加(P<0.05)；

8、與SMIR組比較，SB203580組和TLR4siRNA組大鼠在術后第3d、7d和12d MWT明顯升高(P<0.05)，術后第7d、12d和22d脊髓p-p38MAPK蛋白表達明顯降低(P<0.05)。(3)與術前基礎值及假手術組比較，SMIR組大鼠在術后第3d、7d、12d和22d MWT明顯降低(P<0.05)，術后7d、12d和22d天脊髓TNF-a含量明顯升高(P<0.05)；與SMIR組比較，TLR4siRNA組、SB203