PTEN抑制劑對脊髓損傷神經保護作用的機制研究.pdf

1、第一部分PTEN/mTOR信號通路相關蛋白在不同時期大鼠脊髓中的表達
　　目的:本實驗旨在闡述發(fā)育過程中大鼠脊髓PTEN/mTOR信號通路相關蛋白表達的變化。
　　方法:E15、P0、P7、P56SPF級SD大鼠共42只。采用免疫熒光化學染色和Westernblotting法分別檢測脊髓組織中PTEN/mTOR信號通路相關蛋白的表達。
　　結果:Westernblotting法結果顯示,E15總PTEN表達量極少,P0

2、時表達量顯著增多,到P7時達到高峰,后又逐漸下降;Akt在整個過程表達量未見明顯改變;免疫熒光化學染色法結果顯示,脊髓前角PTEN陽性細胞數于出生后逐漸增多,且可見PTEN在細胞質及細胞核均有表達;而p-PTEN陽性細胞數逐漸減少;p-S6陽性細胞數呈逐漸減少。
　　結論:大鼠脊髓發(fā)育過程中伴隨著PTEN信號通路相關蛋白表達的變化。提示PTEN/mTOR信號通路可能對維持脊髓前角運動神經元的正常生長有著重要的作用。
　　第二

3、部分PTEN/mTOR信號通路相關蛋白在大鼠脊髓損傷后的表達
　　目的:本實驗旨在闡述PTEN/mTOR信號通路相關蛋白在大鼠實驗性脊髓損傷后的表達、時間分布規(guī)律及其在脊髓損傷發(fā)生、發(fā)展中的作用。
　　方法:成年SPF級36只SD大鼠(重量220±20g),對照組僅做椎板切除術,損傷組采用改良Allen's法制作大鼠急性脊髓損傷(SCI)模型,分別于造模后1d、3d處死取材。采用免疫熒光化學染色和Westernblottin

4、g法檢測脊髓組織中PTEN/mTOR信號通路相關蛋白的表達。
　　結果:與對照組相比,脊髓損傷后PTEN表達早期未見明顯變化,3d時下降明顯,而p-S6的表達早期也未見明顯變化,3d時明顯升高。脊髓損傷后大鼠脊髓前角神經元PTEN的表達陽性細胞數在3d時減少。
　　結論:PI3K/PTEN/AKT/mTOR信號轉導通路中重要的調節(jié)位點PTEN在實驗性脊髓損傷后的表達下降,而下游分子p-S6表達正好相反;提示該信號轉導通路在介

5、導實驗性脊髓損傷的發(fā)生、發(fā)展的過程中可能起著重要作用。將PTEN作為靶點,利用其抑制劑進行干預可能對脊髓損傷產生保護作用。
　　第三部分PTEN抑制劑對大鼠脊髓損傷后細胞凋亡的影響
　　目的:觀察PTEN抑制劑bpv(pic)對實驗性大鼠脊髓損傷后細胞凋亡的影響。
　　方法:成年SPF級60只SD大鼠隨機分為對照組、損傷組和藥物組。其中,對照組僅做椎板切除術,損傷組采用改良Allen′s法制作大鼠急性脊髓損傷(SCI)

6、模型,藥物組損傷造模前通過腹腔注射PTEN抑制劑bpv(pic)(20μg/100g)。分別于傷后1d、3d處死取材,對脊髓損傷區(qū)行細胞凋亡TUNEL標記,同時采用BBB評分方法觀察各組神經功能的恢復情況。
　　結果:損傷組和藥物組均可見到TUNEL陽性的凋亡細胞。藥物組較損傷組凋亡陽性細胞數有所減少,且神經功能得到改善。兩組相比在統(tǒng)計學上有顯著性差異(P<0.05)。
　　結論:PTEN抑制劑bpv(pic)能減少繼發(fā)性脊

7、髓損傷細胞凋亡,起到保護作用及促進大鼠神經功能的恢復。
　　第四部分PTEN抑制劑對大鼠脊髓損傷后內源性干細胞的影響
　　目的:觀察PTEN抑制劑對脊髓損傷后內源性神經干細胞的影響。
　　方法:成年SPF級30只SD大鼠隨機分為對照組、損傷組和藥物組。損傷后連續(xù)注射BrdU50mg/kg/d,持續(xù)7天。對照組僅做椎板切除術,損傷組采用改良Allen′s法制作大鼠急性脊髓損傷(SCI)模型。藥物組損傷造模前通過腹腔注射P