兒童激素耐藥型與激素敏感型腎病綜合征尿蛋白組學的初步研究.pdf

1、目的:篩選和鑒定激素耐藥型原發(fā)性腎病綜合征(SRNS)與激素敏感型原發(fā)性腎病綜合征(SSNS)尿液中差異表達的蛋白質,尋找可能與原發(fā)性腎病綜合征激素耐藥、激素敏感及疾病預后相關的蛋白質。
　　方法:研究對象共20例,其中,治療前和治療后SSNS各5例、SRNS 5例、正常對照組5例,提取尿液全蛋白,采用固相pH梯度雙向凝膠電泳(2-DE)方法,建立尿液全蛋白凝膠圖譜;應用投射掃描儀對銀染色后的凝膠圖進行掃描,使用Image Mas

2、ter 2D V3.01分析軟件分析和識別差異表達蛋白質點,利用基質輔助激光解吸/電離飛行時間質譜(matrix-assisted laser desorption/ionization time offlight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)得到差異蛋白質點的肽質量指紋圖譜(PMF),通過Mascot軟件進入NCBI數據庫,鑒定出差異表達蛋白質。
　　結果:正常對照組、SSNS治療前組、SSNS

3、治療后組和SRNS組尿液2-DE凝膠的蛋白質平均檢測點分別為105±7個、204±5個、55±5個和206±8個。SRNS組與SSNS治療前組尿液2-DE凝膠比較篩選出差異蛋白質點66個,其中,僅存在于SRNS組的蛋白質點24個、僅存在于SSNS治療前組的蛋白質點27個;SSNS治療后組與正常對照組尿液2-DE凝膠比較篩選出差異蛋白質點75個,其中,僅在SSNS治療后組出現的蛋白質點11個。本實驗對其中18個差異明顯的蛋白質點進行了MA

4、LDI-TOF-MS分析,鑒定出9類差異表達的蛋白質:①白蛋白結構3區(qū)與一個針對Bcl-xL和Bcl-2的抗凋亡配體的復合物;②白蛋白前體;③Igκ鏈NIG26前體;④α1-抗胰蛋白酶;⑤與Vegfα1-抗胰蛋白酶形成復合物的噬菌體來源的Fab片段;⑥轉鐵蛋白;⑦一個具有廣泛的中和抗艾滋病毒-1抗體晶體結構與模擬肽的復合體;⑧甘露聚糖結合凝集素-相關蛋白19(Map19);⑨帶異類電荷的糖蛋白復合體(protein HC)。