GSH、過氧化氫酶抑制TGF-β2誘導兔晶狀體上皮細胞凋亡及間質(zhì)化研究.pdf

1、目的：
　　 研究體外培養(yǎng)的兔晶狀體上皮細胞(Lens epithelial cells，LECs)加入轉(zhuǎn)化生長因子-β2(transforming growth factor，TGF-β2)及抗氧化劑谷胱甘肽(glutathione，GSH)、過氧化氫酶(catalase，CAT)后，晶狀體上皮細胞的增殖、凋亡及平滑肌肌動蛋白(α-Smooth muscle actin，α-SMA)mRNA的表達情況。探討抗氧化劑影響TGF-

2、β2誘導的晶狀體上皮細胞凋亡及間質(zhì)化的作用機制。
　　 材料與方法：
　　 隨機選取健康2～4周的家兔，雌雄及重量不限(鄭州大學實驗動物中心提供)。耳緣靜脈空氣栓塞處死，體外培養(yǎng)晶狀體上皮細胞，觀察細胞形態(tài)。細胞接近融合傳代，取2、3代傳代細胞進行實驗，分別加入A：75pg/mlTGF-β2；B：75pg/mlTGF-β2+10mMGSH；C：75pg/mlTGF-β2+300U/mLCAT；D：10mMGSH；E：30

3、0U/mLCAT；F：空白對照組。倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，MTT法檢測12、24、48小時的細胞增殖抑制率，TUNEL法檢測細胞凋亡，逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)法檢測細胞α-SMA mRNA含量，各處理組間比較分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.倒置顯微鏡下觀察，三天后原代細胞從囊膜邊緣長出，細胞較透亮，形態(tài)呈多角形，伸出偽足胞漿較豐富。加入75pg/mlTGF-β2后，細胞間隙增加，呈現(xiàn)拉網(wǎng)狀改變，細胞開始出現(xiàn)腫脹并隨

4、時間的推移細胞呈梭形改變，加入抗氧化劑后細胞改變減少。
　　 2.MTT法檢測晶狀體上皮細胞增殖抑制率：檢測12、24、48h三個時間點，A組的細胞增殖抑制率分別為14.6±a：4.62％，28.8±3.83％，34.2±2.49％，B組細胞增殖抑制率分別為15.4±5.13％，28.6±3.78％，31.0±4.18％，C組細胞增殖抑制率分別為14.6±3.36％，27.2±3.96％，33.6±2.50％，A分別與B、C組比

5、較P>0.05，差異無統(tǒng)計學意義。
　　 3.TUNEL法檢測細胞凋亡：熒光顯微鏡下觀察凋亡細胞呈綠色熒光。D、E、F組偶見呈綠色熒光的細胞，A組有較多綠色熒光細胞。B、C組綠色熒光的細胞數(shù)量明顯減少。每個處理組隨機選擇三個視野，以凋亡細胞數(shù)量/視野細胞總數(shù)量來計算細胞凋亡率，F(xiàn)=142.873，P<0.05，各組之間細胞凋亡率不完全相同。A組細胞凋亡率為30.78±3.17％，分別與B、C組細胞凋亡率比較P<0.05，差異有統(tǒng)

6、計學意義。
　　 4.RT-PCR檢測晶狀體上皮細胞中α-SMA蛋白mRNA表達：各實驗組在516bp處出現(xiàn)特異性α-SMA條帶。A組α-SMA mRNA灰度值為0.863±0.020，分別與B、C組α-SMA mRNA灰度值比較P<0.05，差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)論：
　　 1.TGF-β2可以抑制LECs增殖，并誘導細胞凋亡，促進上皮細胞間質(zhì)化。
　　 2.加入抗氧化劑GSH、CAT后可以降低L