先天性無陰道患者HLA-A、DRB1等位基因多態(tài)性研究及乙狀結腸代陰道成形術后隨訪.pdf

1、先天性無陰道(MRKHS)是原發(fā)性閉經的第二大原因，目前其病因尚不清楚，多認為該病是一種多基因多因素遺傳性疾病。MRKHS患者無陰道，幾乎均合并無子宮，因而不能進行性交、無生育能力，故嚴重影響了患者的生活質量。針對本病的治療主要是陰道成形術，乙狀結腸法陰道成形術是臨床應用較多的一種術式。目前，國內相關的文獻多為陰道成形術術式方面的報道，針對：MRKHS的病因及術后隨訪方面的研究較少。本實驗內容主要包括以下三部分： 第一部分：先天

2、性無陰道患者HLA-A、DRB1等位基因多態(tài)性研究目的：研究HLA-A、DRB1等位基因多態(tài)性與先天性無陰道遺傳易感性的相關性，為尋找先天性無陰道的易感基因提供線索。 方法： 2005年10月～2007年1月，在河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院就診及隨訪的MRKHS患者中選取研究對象。MRKHS組(研究組)：選擇河北省籍漢族患者30例，患者染色體核型應為46，XX；對照組：在河北省血液中心骨髓庫中隨機選取300例，為河北省籍、漢族、

3、健康、無親緣關系的女性。取患者2mL外周血，乙二胺四乙酸二鉀(EDTAK2)抗凝，用離心柱法提取DNA，進行擴增、雜交后使用流式雜交儀luminex<'100>分析樣品，即用流式磁珠法PCR-SSOP技術檢測樣品中的HLA-A、DRB1等位基因位點。用SASv6.12統(tǒng)計軟件處理數(shù)據，采用X<'2>檢驗、Fisher確切概率法分析，P<0.05為差異有顯著性，對于兩組差異有顯著性的基因計算其疾病比值比(OR)。結果1 HLA-A基因分型

4、：MRKHS患者的HLA-A基因共檢出11個位點，其中HLA-A<'*>33等位基因頻率為0.1167，明顯高于對照組的0.0300，差異有顯著性(P<0.05)，OR>1；HLA-A<'*>24等位基因頻率為0.0667，明顯低于對照組的0.1717，差異有顯著性(P<0.05)，OR<1。 2 HLA-DRB1基因分型： MRKHS患者的HLA-DRB1基因檢出12個位點，HLA-DRB1<'*>13等位基因頻率為0.133

5、3，明顯高于對照組的基因頻率0.0217，差異有顯著性(P<0.05)，OR>1。 結論： 中國河北省漢族人群中，HLA-A<'*>33、HLA-DRB1<'*>13等位基因與先天性無陰道的發(fā)生可能存在正相關，為進一步探尋先天性無陰道的易感基因提供了線索。 第二部分先天性無陰道患者生活質量及心理狀況調查分析目的：了解先天性無陰道(MRKHS)患者的生活質量(QOL)及心理狀況。 方法：使用生活質量綜合評定

6、問卷(GQOLI-74)、焦慮自評量表(SAS)和抑郁自評量表(SDS)，對43例MRKHS患者及43名正常對照進行調查。采用SASv6.12統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，應用t檢驗(兩樣本方差不齊時做t’檢驗)、X<'2>檢驗和相關分析，P<0.05為差異有顯著性。 結果： MRKHS組GQOLI-74的心理功能緯度評分低于正常對照組(59.15±13.12vs67.57±13.51)，社會功能緯度評分低于正常對照組(54.4

7、0±11.41 vs 62.90±12.40)，GQOLI-74總評分低于正常對照組(57.48±8.34 vs 62.82±9.79)，差異均有顯著性(P<0.01)。MRKHS患者的SAS平均得分為(45.98±10.32)，高于正常對照組(39.09±9.42)，差異有顯著性(P<0.01)，與GQOLI-74總評分呈負相關(r=-0.64，P=0.0001)，MRKHS組SDS平均指數(shù)為(0.50±0.13)，高于正常對照組(0

8、.41±0.11)，差異有顯著性(P<0.01)，與GQOLI-74總評分呈負相關(r=-0.65，P=0.0001)。 結論： 先天性無陰道患者的生活質量較正常對照者差，易出現(xiàn)焦慮和抑郁癥狀。 第三部分乙狀結腸代陰道術后人工陰道粘膜的形態(tài)學改變及神經型-氧化氮合酶表達的研究目的：觀察乙狀結腸代陰道成形術后人工陰道粘膜的形態(tài)學改變及粘膜內神經型一氧化氮合酶(nNOS)表達的變化，探討結腸移位后的形態(tài)學改變及nNO

9、S表達變化與人工陰道分泌物減少的相關性。 方法： 在2005年10月～2007年1月隨訪到的乙狀結腸代陰道成形術后的患者中選取研究對象，取得患者知情同意后，有10例患者自愿參加本項研究。在MRKHS組的人工陰道上段(陰道上1/3)及下段(距陰道口約3cm處)分別活檢留取移位的乙狀結腸粘膜標本。對照組標本取自2005～2006年間行乙狀結腸代陰道術的患者的正常乙狀結腸。標本經HE染色后在光鏡下觀察術后移位的乙狀結腸粘膜的形

10、態(tài)學變化；隨機選取3例人工陰道上段標本進行電鏡觀察。采用免疫組織化學法檢測標本的nNOS表達情況。使用SASv6.12統(tǒng)計軟件進行分析，采用Fisher確切概率法檢驗。 結果： 1 一般情況：MRKHS組的標本取材距手術的間隔時間平均為27.6月；術后人工陰道分泌物開始減少的平均時間為7.5月；術后性生活史平均長約18.3月；人工陰道PH值平均為7.9。 2 病理學檢查結果：光鏡下觀察MRKHS組的人工陰道上段粘

11、膜：粘膜上皮層無明顯變化，粘膜肌層肥厚增生，粘膜下層的神經叢密度為3.6±1.5，高于對照組的1.7±0.8，差異有顯著性(P<0.05)。人工陰道下段粘膜：10<'->例中有7例發(fā)生鱗狀上皮化生，腺體數(shù)量明顯減少并萎縮，間質成分增多，粘膜肌層及粘膜下層消失。 3 電鏡檢查結果：掃描電鏡：MRKHS組的代陰道乙狀結腸粘膜表面凹凸不平，杯狀細胞的分泌泡較少。透射電鏡：代陰道乙狀結腸粘膜的柱狀上皮細胞和杯狀細胞內均可見線粒體的部分嵴

12、和膜融合或消失，粗面內質網有脫顆?，F(xiàn)象。 4 nNOS的表達變化：nNOS在MrKHS組及對照組的結腸粘膜中均有表達，MRKHS組人工陰道上段粘膜上皮中nNOS表達呈陽性，弱于對照組，差異有顯著性(P<0.05)，腺體上皮細胞中nNOS表達呈弱陽性，弱于對照組，差異有顯著性(P<0.05)。 結論： 1 乙狀結腸代陰道成形術后移位的結腸粘膜的形態(tài)學變化與人工陰道分泌物的逐漸減少可能有相關性，這種形態(tài)學的變化可能與