三疣梭子蟹MyD88,TRAF6基因的克隆及在抗感染過程中的作用研究.pdf

1、Pt-MyD88和Pt-TRAF6是三疣梭子蟹Toll信號通路中關(guān)鍵接頭蛋白分子，在甲殼動物先天免疫應答反應中起著重要的作用。本研究利用常規(guī) PCR和RACE技術(shù)首先獲得了三疣梭子蟹 Pt-MyD88和 Pt-TRAF6基因的cDNA全長，Pt-MyD88全長1736bp，開放閱碼框（ORF）長1410bp編碼469個氨基酸，Pt-TRAF6全長2251bp,ORF長1800bp編碼599個氨基酸。對目的基因蛋白序列進行同源性分析發(fā)現(xiàn)，

2、Pt-MyD88和 Pt-TRAF6與甲殼動物相似性最高。通過實時熒光定量PCR分析Pt-MyD88和Pt-TRAF6在梭子蟹不同組織中的分布，結(jié)果顯示 Pt-MyD88在血，鰓，腸道，心臟表達量比較高，在肌肉中表達量最低，Pt-TRAF6在鰓和血中表達量較高，腸道，心臟，肌肉表達量較低。同時利用實時熒光定量PCR檢測在不同溫度和鹽度脅迫條件下Pt-MyD88和Pt-TRAF6的表達量變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同溫度和鹽度下Pt-MyD88和Pt

3、-TRAF6的表達無顯著差異。用病原微生物假絲酵母菌，溶藻弧菌，WSSV及脂多糖（LPS）分別刺激健康梭子蟹，定量PCR檢測Pt-MyD88和Pt-TRAF6的表達量變化發(fā)現(xiàn)，Pt-MyD88在假絲酵母菌，溶藻弧菌和LPS刺激后，鰓中表達量顯著上調(diào)，WSSV刺激后，血中表達量顯著上調(diào)。溶藻弧菌，LPS，WSSV刺激后Pt-TRAF6在鰓中的表達量明顯上調(diào)，在血中則相反。說明Pt-MyD88和Pt-TRAF6確實在梭子蟹先天免疫應答反應中