PDGF-BB通過(guò)誘導(dǎo)epiregulin表達(dá)促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖.pdf

1、研究目的:
　　 研究表皮調(diào)節(jié)素(epiregulin)在血小板源性生長(zhǎng)因子-BB(platelet—derived growth factor-BB,PDGF—BB)促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖中的作用,并闡明這種作用是特異存在于VSMC中還是普遍存在多種類型的腫瘤細(xì)胞中。
　　 研究方法:
　　 培養(yǎng)血管平滑肌細(xì)胞株CS-54、胃癌細(xì)胞株BGC-8

2、23、SGC-7901、乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和肺癌細(xì)胞株A549,用Western blotting法檢測(cè)epiregulin在這些細(xì)胞株中有無(wú)表達(dá),然后進(jìn)一步檢測(cè)PDGF-BB對(duì)epiregulin蛋白表達(dá)的影響；用Real-time PCR法檢測(cè)PDGF—BB對(duì)CS-54細(xì)胞epiregulin mRNA表達(dá)的影響；針對(duì)大鼠epiregulin基因的mRNA序列合成siRNA,采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將其轉(zhuǎn)染CS-54細(xì)胞；用Wester

3、n blotting法檢測(cè)siRNA轉(zhuǎn)染后CS-54細(xì)胞中epiregulin蛋白表達(dá)的變化；用MTT法檢測(cè)PDGF-BB在不同濃度和不同作用時(shí)間下對(duì)CS-54細(xì)胞增殖效應(yīng)的影響；Epiregulin siRNA轉(zhuǎn)染48 h后加入PDGF—BB,然后進(jìn)一步分析干擾epiregulin表達(dá)對(duì)PDGF-BB促進(jìn)CS-54細(xì)胞增殖效應(yīng)的影響。
　　 研究結(jié)果:
　　 (1)在血管平滑肌細(xì)胞株CS-54和乳腺癌細(xì)胞株MCF-7中

4、檢測(cè)到epiregulin的蛋白表達(dá),其它細(xì)胞株如胃癌細(xì)胞BGC-823、SGC-7901和肺癌細(xì)胞A549中沒(méi)有檢測(cè)到epiregulin的蛋白表達(dá)。
　　 (2)從mRNA水平和蛋白水平檢測(cè)到PDGF—BB可使CS-54細(xì)胞epiregulin表達(dá)上調(diào),但對(duì)MCF-7細(xì)胞不起作用。
　　 (3)PDGF—BB促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖,效應(yīng)具有濃度和時(shí)間依賴性,在50ng／ml PDGF-BB作用24h時(shí)其作用最為明顯(