甘藍(lán)枯萎病菌中一個(gè)新致病基因的克隆與功能驗(yàn)證.pdf

1、CloningandFunctionalVerificationofaNovelPathogenicityGeneinFusariumoxysporumfspcong／utinansThesissubmittedtoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyFengJianhai(Departmentof

2、AgronomyandPlantProtection)Supervisor：AssociateProfessorHuangJinguang，ProfessorLiXinghongQingdaoChinaJune，2013摘要由尖孢鐮刀菌粘團(tuán)專化型(Fusariumoxyzporumfspconglutinan)l起的甘藍(lán)枯萎病是一種世界性分布的土傳病害，該病發(fā)生地區(qū)導(dǎo)致甘藍(lán)年均損失2030％，嚴(yán)重時(shí)可能絕產(chǎn)。目前，甘藍(lán)枯萎病菌的生物學(xué)特

3、征與侵染過程較為明析，但對(duì)甘藍(lán)枯萎病菌分子機(jī)理的研究較為匱乏。因此，本研究從甘藍(lán)枯萎病菌致病力衰減突變體入手，分離鑒定甘藍(lán)枯萎病菌致病相關(guān)基因，為從分子水平解析該病原菌的致病機(jī)理提供了一定基礎(chǔ)。作者首先通過對(duì)限制性內(nèi)切酶的種類及酶量對(duì)甘藍(lán)枯萎病菌REMI(RestrictionEnzymeMediateIntergration)轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行優(yōu)化，建立了高效的REMI轉(zhuǎn)化體系。采用ttindIII和EcoR1分別線性化的pUCATPH轉(zhuǎn)化

4、了Fusariumoxysporumfspconglutinans野生型菌株A6，累計(jì)獲得了1056株轉(zhuǎn)化子。對(duì)上述轉(zhuǎn)化子庫(kù)進(jìn)行了陽(yáng)性率、插入位點(diǎn)數(shù)、表型突變率等方面進(jìn)行了評(píng)估，且獲得了6個(gè)生長(zhǎng)速率減慢的突變體、8個(gè)產(chǎn)孢量減少和4個(gè)產(chǎn)孢量增多的突變體。另外，通過質(zhì)粒拯救技術(shù)獲得了3個(gè)生長(zhǎng)速率減慢突變體的側(cè)翼系列。利用兼并引物獲得了突變體F40甘藍(lán)枯萎病菌中的候選基因FOCI區(qū)域序列。通過基因敲除技術(shù)獲得了上述基因的3個(gè)敲除體，敲除體表型