兒童常見實體惡性腫瘤診斷和治療相關基因篩選的研究.pdf

1、第一部分：動態(tài)監(jiān)測小兒惡性腫瘤化療兒外周血MDR1、MRP、LRP的表達
　　 目的：探討小兒實體惡性腫瘤化療患兒外周血單個核細胞（Peripheral blood mononuclear cells，PBMCs）中多藥耐藥基因（Multi-drug resistancel，MDR1）、多藥耐藥相關蛋白基因（Multi-drugresistance-associated proteinl，MRP）、肺耐藥蛋白基因（Lung re

2、sistanceprotein，LRP）的表達量及其與臨床化療的關系。
　　 方法：經病理證實的腫瘤患兒59例，其中神經母細胞瘤組24例，卵黃囊瘤組16例，淋巴瘤組19例；30例健康兒童作對照組。應用實時熒光定量PCR（Real-time fluorescence quantitative PCR，FQ-PCR）技術，檢測化療患兒化療前后外周血和手術切除新鮮凍存組織，以及對照組外周血中MDR1、MRP、LRP的mRNA表達量；常

3、規(guī)檢測化療患兒化療前后相應腫瘤標志物的變化。運用統(tǒng)計學方法將化療患兒化療前與對照組外周血中MDR1、MRP、LRP的mRNA表達量進行T檢驗；化療患兒化療前后外周血中MDR1、MRP、LRP的mRNA表達量與手術切除腫瘤組織的MDR1、MRP、LRP的表達量、相應腫瘤標志物化療前后的變化程度作相關性分析。
　　 結果：神經母細胞瘤組、卵黃囊瘤組化療前MDR1的表達量明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；淋巴瘤組化療

4、前MDR1的表達量與對照組差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；所有化療患兒外周血中MRP、LRP表達量化療前與對照組差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。所有化療患兒外周血MDR1表達量與同期手術切除的腫瘤組織MDR1表達量存在正相關（r=0.894，P=0.000）；化療前外周血MDR1表達量與首次化療后相應腫瘤標志物變化大小的關系，神經母細胞瘤尿香草杏仁酸（VMA）（r=-0.440，P=0.046），卵黃囊瘤甲胎蛋白（AFP）（r=-0

5、.831，P=0.000），淋巴瘤乳酸脫氫酶（LDH）（r=-0.495，P=0.031）?；熁純弘S著化療次數的增加MDR1表達量增加。
　　 結論：神經母細胞瘤與卵黃囊瘤可能存在一定程度的原發(fā)耐藥；外周血的MDR1表達及組織MDR1表達與化療療效有明顯負相關；化療可誘導各種惡性實體瘤患兒：PBMCs中MDR1表達增加，對MRP、LRP影響不大；動態(tài)檢測患兒化療前后PBMCs中mdr1 mRNA水平對化療療效及預后判定有一定的

6、參考作用。
　　 第二部分神經母細胞瘤相關標志物的檢測
　　 目的：探討運用實時熒光定量PCR（Real-time fluorescencequantitative PCR，FQ-PCR）定量檢測BCL-2基因mRNA在神經母細胞瘤（NB）的表達和運用ELISA方法檢測神經母細胞瘤患兒外周血VEGF、NSE、SF的表達，及其與神經母細胞瘤發(fā)生、發(fā)展和預后的關系。
　　 方法：收集神經母細胞瘤患兒手術切除標本16例

7、，--80℃保存，其中化療前標本6例、化療后標本8例、既有化療前又有化療后標本2例，并在設定時間采集患兒外周血，離心收集血漿-80℃保存。應用實時熒光定量PCR檢測所有標本中BCL-2和N-MYC基因的mRNA表達情況，同時收集相應腫瘤標本的石蠟切片，進行免疫組化檢測。運用ELISA方法檢查神經母細胞瘤患兒外周中VEGF、NSE、SF的表達。采用Evans標準對神經母細胞瘤患兒進行臨床分期，所有組織標本均進行Shimade分型。運用統(tǒng)計

8、學方法比較Ⅰ～Ⅱ及ⅣS期與Ⅲ-Ⅳ期、F型與UF型、化療前與化療后神經母細胞瘤組織中BCL-2基因的mRNA表達量的大小及BCL-2蛋白表達陽性率的大??；分析BCL-2的表達與N-MYC基因和耐藥基因表達的相關性；及化療、手術前后外周血VEGF、NSE、SF的表達變化；BCL-2、VEGF、NSE、SF與神經母細胞瘤發(fā)生、發(fā)展、預后的關系。
　　 結果：實時熒光定量PCR檢測的BCL-2基因mRNA在神經母細胞瘤組織中的表達量Ⅲ～

9、Ⅳ期明顯高于Ⅰ～Ⅱ及ⅣS期（P<0.05）、UF型明顯高于F型（P<0.05）、化療后高于化療前的表達（P<0.05），免疫組化結果與PCR結果基本一致；BCL-2的表達與N-MYC的拷貝數呈明顯正相關（P<0.05），與耐藥基因的表達無明顯相關（P>0.05）；BCL-2、VEGF、NSE、SF的表達量與神經母細胞瘤患兒的預后呈負相關（P<0.05）。
　　 結論：BCL-2作為一種重要的凋亡調控基因，運用實時熒光定量PCR檢