結腸癌中骨橋蛋白與環(huán)氧化酶-2的相關性及臨床意義的研究.pdf

1、消化道腫瘤的發(fā)病率逐漸成上升趨勢，結直腸癌的發(fā)病率在各種消化道腫瘤中已升至第2位。由于早期缺乏典型的癥狀和體征，給診斷帶來一定的困難，臨床上就診的大部分患者屬于中、晚期結腸癌，多失去手術機會。結腸癌患者的主要死因是腫瘤復發(fā)及肝臟轉移，因此早期認識結腸癌有無轉移、轉移途徑以及轉移范圍對于指導臨床治療、提高結腸癌患者的預后具有重要意義。近年來，非細胞毒性藥物在腫瘤治療中的作用備受關注，其中COX-2抑制劑抑制腫瘤生長的研究已取得較大進展。塞

2、來昔布是一種高選擇性的COX-2抑制劑，對COX-2的抑制強度為COX-1的375倍，與非選擇性的COX-2抑制劑相比，胃腸道出血等不良反應的發(fā)生率明顯降低。
　　COX是花生四烯酸代謝中的重要限速酶，分為兩種異構體:COX-1和COX-2。COX-1在大多數(shù)細胞和組織中穩(wěn)定表達，主要起維持正常生理功能的作用。而COX-2是一種可以誘導表達的酶，在大多數(shù)正常組織中表達呈陰性，當細胞受損傷或其他刺激的情況下可大量增加。COX-2與人

3、類多種腫瘤密切相關，參與調(diào)控腫瘤發(fā)生和發(fā)展的多種機制。它可以抑制腫瘤細胞凋亡，抑制宿主的免疫應答，逃避對腫瘤細胞的免疫監(jiān)視，并可促進腫瘤血管生成及腫瘤復發(fā)和轉移。
　　人OPN基因是單一編碼基因，位于染色體4q13上。Yeatman等在綜合研究新的有關腫瘤和腫瘤進展的標志物時，通過應用基因表達圖譜技術篩選大約12000個基因，最終確定OPN為臨床上結腸癌首選的生物學標記。OPN與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關系密切，它可以促進腫瘤細胞的趨化、粘

4、附，抑制腫瘤細胞的凋亡，促進細胞外基質(zhì)降解，促進腫瘤血管的形成。OPN的過表達與肝癌、乳腺癌、胃癌等腫瘤的惡性程度、轉移、早期復發(fā)等有關。對OPN的研究逐漸成為腫瘤治療的一個熱點。
　　目前選擇性COX-2抑制劑抑制結腸癌細胞增殖，誘導結腸癌細胞凋亡是腫瘤學專家們關注的研究領域之一，一些學者已進行了富有成效的探索，但選擇性COX-2抑制劑抗結腸癌的確切分子機制至今尚不十分清楚。本課題研究選擇性COX-2抑制劑塞來昔布對HT-29結

5、腸癌細胞增殖和凋亡的影響及相關的分子機制，為塞來昔布抗結腸癌的臨床應用提供實驗依據(jù)。
　　第一章:結腸癌中骨橋蛋白與環(huán)氧化酶-2的表達及臨床意義
　　目的：研究骨橋蛋白(OPN)與環(huán)氧化酶-2(COX-2)在結腸癌組織中的表達水平，并探討兩者與結腸癌轉移浸潤的關系。
　　方法：應用免疫組化法檢測60例結腸癌組織和16例癌旁正常組織中OPN與COX-2的表達，并分析二者的表達水平與臨床病理特征的關系及二者的表達相關性。<

6、br>　　結果：
　　1.OPN和COX-2在結腸癌組織中表達的陽性率明顯高于癌旁正常結腸組織。
　　2.OPN和COX-2蛋白的表達與患者的性別、年齡、腫瘤大小無關，與腫瘤分期、淋巴結轉移有關，二者在結腸癌組織中表達呈正相關。
　　結論：OPN和COX-2在結腸癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，聯(lián)合檢測可作為判斷結腸癌惡性程度和預后的指標。
　　第二章塞來昔布對結腸癌HT-29細胞生長及其骨橋蛋白表達的影響
　　

7、目的：通過觀察塞來昔布對結腸癌HT-29細胞的生長、凋亡及對骨橋蛋白、環(huán)氧化酶-2表達的影響，探討塞來昔布抗腫瘤的作用機制。
　　方法：體外培養(yǎng)結腸癌HT-29細胞，以不同濃度塞來昔布干預人結腸癌細胞株HT-29，MIT法檢測細胞增殖抑制情況，流式細胞術分析細胞的凋亡，RT-PCR和免疫組化分析細胞中的OPNmRNA、COX-2 mRNA及其蛋白表達變化。
　　結果：
　　1.塞來昔布對HT-29細胞增殖有明顯的抑制作

8、用，并且抑制程度和藥物作用時間與藥物作用濃度之間存在依賴效應。
　　2.塞來昔布能誘導HT-29細胞凋亡，凋亡率隨藥物濃度增加而逐漸增高。
　　3.RT-RCR及免疫組化的結果顯示，藥物干預組和細胞對照組相比HT-29細胞的OPNmRNA、COX-2 mRNA及其蛋白表達下降。
　　結論：塞來昔布可能通過抑制OPN的表達，抑制結腸癌HT-29細胞的增殖、誘導其凋亡，OPN和COX-2之間可能存在某種復雜的關聯(lián)，具體的聯(lián)