基質(zhì)金屬蛋白酶3-MMP3在抗登革病毒感染中的作用及機制的研究.pdf

1、登革病毒是當今世界上分布最廣的一種蟲媒傳染病毒,主要由叮咬人的埃及伊蚊和白紋伊蚊傳播。據(jù)WHO估計,全球每年新增數(shù)百萬的登革病毒感染者,因登革病毒感染導(dǎo)致死亡的人數(shù)約2.5萬。目前,登革病毒感染的機制仍不明確,由于各血清型之間缺乏有效的交叉保護,又存在抗體依賴的增強作用等,至今仍無安全有效的疫苗可用。因此,研究宿主抗登革病毒的分子機制,對于了解登革熱的發(fā)病過程具有重要意義。
　　本文從JAK-STAT信號通路入手,來研究宿主細胞抗

2、登革病毒感染的分子機制,著重關(guān)注包括基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP3)在內(nèi)的幾個JAK-STAT下游效應(yīng)分子在抗登革病毒感染中的具體作用。我們研究在登革病毒感染巨噬細胞前后,84個JAK-STAT相關(guān)基因的表達變化。結(jié)果顯示基質(zhì)金屬蛋白酶MMP3表達上調(diào)了3.68倍。為了進一步驗證PCR芯片的結(jié)果,我們又用定量PCR的方法在多種細胞中證明了MMP3在登革病毒感染的細胞中表達上調(diào)。抑制MMP3的表達,病毒的感染水平顯著上升;而在RAW264.7

3、細胞中過表達MMP3又可以抑制登革病毒的復(fù)制,這就揭示MMP3具有抗登革病毒感染的作用。為了了解MMP3抗病毒的分子機制,我們分別檢測了MMP3沉默的細胞和對照細胞經(jīng)登革病毒感染后,代表性抗病毒相關(guān)細胞因子的表達。結(jié)果發(fā)現(xiàn),MMP3沉默的細胞中,抗病毒相關(guān)細胞因子和趨化因子的表達水平顯著降低。免疫熒光發(fā)現(xiàn)MMP3在登革病毒感染的細胞中會發(fā)生從細胞質(zhì)到細胞核的遷移;而且雙熒光素酶報告基因檢測結(jié)果顯示,在病毒感染的細胞中,沉默掉MMP3,N

4、FκB的轉(zhuǎn)錄活性下調(diào),過表達MMP3又可以很強地激活NFκB。鑒于以上這些結(jié)果,我們推測MMP3很有可能是通過進入細胞核來影響NFκB的轉(zhuǎn)錄活性從而達到抗病毒作用。在后續(xù)實驗中通過采用熒光定位和免疫共沉淀的方法得到了MMP3與NFκB在登革病毒感染的細胞中存在相互作用的結(jié)果。MMP3由信號域,前肽域,催化域,鉸鏈區(qū)和羧基末端域等5個結(jié)構(gòu)域組成,為了檢測與NFκB相互作用的結(jié)構(gòu)域,我們構(gòu)建了含MMP3各個結(jié)構(gòu)域的質(zhì)粒,并分別與NFκB的兩