ETS2在乳腺癌細(xì)胞中調(diào)控CXCR4轉(zhuǎn)錄的機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究人紅血細(xì)胞增多癥病毒致癌基因同源體2(ETS2)對(duì)人乳腺癌細(xì)胞中趨化因子受體CXCR4表達(dá)的影響，以及ETS2調(diào)控CXCR4轉(zhuǎn)錄的分子機(jī)制。
　　方法:在MCF-7乳腺癌細(xì)胞株以及MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞株中，通過瞬時(shí)轉(zhuǎn)染技術(shù)，以及RNAi技術(shù)，過表達(dá)ETS2或抑制ETS2的表達(dá)。然后，分別應(yīng)用RT-PCR以及ELISA檢測(cè)CXCR4 mRNA的表達(dá)和蛋白水平，熒光酶素報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測(cè)啟動(dòng)子活性，ChIP實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)

2、合到CXCR4啟動(dòng)子上的ETS2的量。并且，對(duì)CXCR4啟動(dòng)子上的2個(gè)ETS結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行突變，通過熒光報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)，檢測(cè)突變對(duì)CXCR4啟動(dòng)子活性的影響。
　　結(jié)果:轉(zhuǎn)染了ETS2過表達(dá)質(zhì)粒的MDA-MB-231細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞中，CXCR4的表達(dá)在mRNA水平和蛋白水平都有升高;報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果提示，ETS2通過激活CXCR4啟動(dòng)子的活性提高CXCR4的表達(dá);通過ChIP實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在轉(zhuǎn)染了ETS2表達(dá)質(zhì)粒的MDA-MB-23

3、1細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞中，結(jié)合到CXCR4啟動(dòng)子上的ETS2的蛋白量提高了，提示ETS2通過直接結(jié)合到CXCR4啟動(dòng)子上，從而提高CXCR4啟動(dòng)子的活性;利用RNA干擾技術(shù)，抑制ETS2的表達(dá)，可以顯著減弱CXCR4啟動(dòng)子的活性，降低CXCR4的表達(dá)和結(jié)合到CXCR4啟動(dòng)子上的ETS2的量;對(duì)CXCR4啟動(dòng)子的2個(gè)ETS結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行突變，熒光酶索報(bào)告基因的結(jié)果顯示，任意一個(gè)位點(diǎn)的突變都降低了CXCR4啟動(dòng)子的活性，兩個(gè)位點(diǎn)的同時(shí)突變使C