免疫治療結(jié)束后腫瘤微環(huán)境中的IFN-γ撤除通過增強整合素αvβ3信號導致有潛力的腫瘤細胞侵襲轉(zhuǎn)移.pdf

1、華中科技大學博士學位論文免疫治療結(jié)束后腫瘤微環(huán)境中的IFNγ撤除通過增強整合素αvβ3信號導致有潛力的腫瘤細胞侵襲轉(zhuǎn)移姓名：龔偉申請學位級別：博士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：馮作化張桂梅20090501華中科技大學同濟醫(yī)學院博士畢業(yè)論文2（CH50多肽）補救，達到抑制腫瘤細胞生長和侵襲的作用。本實驗研究內(nèi)容主要分為以下五部分：第一部分：研究腫瘤免疫治療后殘存腫瘤細胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力。免疫治療并不能完全清除腫瘤細胞，而且我們不清楚殘

2、存腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移能力又發(fā)生什么改變？體內(nèi)轉(zhuǎn)染41BBLsPD1質(zhì)粒，RTPCR和Westernblot結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染48h后，小鼠肌肉注射部位均有41BBL和sPD1mRNA和蛋白質(zhì)表達。體內(nèi)轉(zhuǎn)染p41BBLpsPD1質(zhì)粒進行基因治療，能夠顯著抑制小鼠腿部腫瘤生長，腫瘤生長速率顯著低于空白對照組和pcDNA3.1組。動物實驗結(jié)果表明，經(jīng)過p41BBLpsPD1質(zhì)粒治療的腫瘤組織塊其肝移植瘤明顯大于空白對照組和pcDNA3.1組的肝移植瘤

3、，肝表面可見較多的轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)。第二部分：研究免疫治療結(jié)束后殘存的腫瘤細胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的變化及其影響因素。IFNγ是腫瘤免疫治療中非常重要的細胞因子，IFNγ具有明顯抑制小鼠腿部腫瘤生長的作用。采用IFNγELISA試劑盒檢測，結(jié)果顯示p41BBLpsPD1組治療結(jié)束時和治療結(jié)束后14天IFNγ濃度降低10倍。IFNγ治療后的移植瘤停用IFNγ治療，肝移植瘤生長速度加快，瘤體明顯增大，而且肝表面可見多個轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)。體外經(jīng)IFNγ處理的B16細

4、胞和H22細胞分別接種于C57BL6和BALBc小鼠的肝臟，16天后解剖小鼠，IFNγ撤除組（接種IFNγ處理的瘤細胞后，動物不再進行免疫治療組），腫瘤生長明顯增強，瘤體明顯增大。第三部分：研究旨在觀察IFNγ處理和撤除后腫瘤細胞生物學特性的改變，并探討引起這些生物學特性改變可能的機制。IFNγ處理后濃度降低s速度與細胞體外增殖速度成正比。而且IFNγ撤除后B16細胞在抵抗MMC誘導凋亡、粘附以及恢復粘附能力、侵襲能力等方面均明顯高于對

5、照組細胞。同時應用RealTimePCR、westernblot檢測相關(guān)基因變化情況：與增殖、抵抗凋亡正相關(guān)的基因如cMyc、Bcl2和BclxL表達均明顯高于對照組細胞；而負相關(guān)基因如p21WAF1、p27Kip和Bax均明顯低于對照組細胞；Westernblot檢測ERK12、JNK磷酸化，IFNγ撤除后B16細胞的ERK12、JNK磷酸化水平增高。尾靜脈接種IFNγ處理B16細胞于小鼠，5、24小時小鼠肺部腫瘤熒光數(shù)目明顯高于對照