腺樣囊性癌耐藥細胞株ACC-M-DDP的建立及其多藥耐藥機制研究.pdf

1、第一部分人腺樣囊性癌耐藥細胞株ACC-M/DDP的誘導建立 目的：針對目前頭頸部腫瘤在化療中產生的耐藥性問題，建立人腺樣囊性癌耐藥細胞株ACC-M/DDP并研究其生物學特性，為腺樣囊性癌的臨床治療提供實驗依據。 方法：以腺樣囊性癌細胞株ACC-M為誘導對象，順鉑為誘導藥物，采用大劑量沖擊和逐漸增加劑量相結合的方法建立了在1μg/ml順鉑作用下生長良好的耐藥細胞株ACC-M/DDP；MTT法檢測ACC-M/DDP細胞及親代

2、細胞對不同化療藥物敏感性，細胞計數法繪制細胞生長曲線，流式細胞術測定細胞周期。 結果：成功誘導建立了人腺樣囊性癌多藥耐藥細胞株ACC-M/DDP；MTT藥物敏感性檢測結果表明其對CDDP、Taxol、5-FU和CTX有不同程度的耐受性，其耐藥指數分別為7.26、3.32、4.18和4.82。細胞計數法顯示ACC-M和ACC-M/DDP細胞的倍增時間分別為21.3和28.7小時，流式細胞儀顯示耐藥細胞ACC-M/DDP與ACC-M

3、相比S期明顯增多(P＜0.05)。 結論：所獲得的耐藥細胞株ACC-M/DDP細胞性狀穩(wěn)定，是可靠的人腺樣囊性癌多藥耐藥細胞模型，與親本細胞ACC-M相比生物學特性有明顯差異?？捎糜谙贅幽倚园┒嗨幠退帣C制的研究。 第二部分 MDR1基因在人腺樣囊性癌多藥耐藥細胞株ACC-M/DDP中的表達及臨床意義 目的：探討MDR1基因在人腺樣囊性癌多藥耐藥細胞株ACC-M/DDP中的表達及臨床意義，為研究腫瘤的多藥耐藥性及其

4、逆轉劑提供理論依據。 方法：流式細胞術測定熒光藥物羅丹明123在ACC-M和ACC-M/DDP細胞中的蓄積，RT-PCR檢測細胞內MDR1 mRNA的表達，建立裸鼠腮腺移植瘤模型，免疫組化法檢測移植瘤模型中P-gp表達情況。 結果：羅丹明123結果顯示耐藥細胞ACC-M/DDP和親本細胞ACC-M細胞內相對熒光強度分別為1.4±0.2和38.9±0.4(P<0.01)，RT-PCR結果顯示MDR1基因在ACC-M細胞不表

5、達，而在ACC-M/DDP細胞耐藥細胞呈高表達。ACC-M組、ACC-M/DDP細胞組裸鼠移植瘤出現時間分別為(8.00±1.76)d、(14.17±1.17)d，耐藥組瘤體生長速度緩慢，浸潤性降低。免疫組化結果P-gp在ACC-M/DDP中強表達而在ACC-M中未表達。 結論：由順鉑誘導篩選的腺樣囊性癌ACC-M/DDP細胞株產生的多藥耐藥性與MDR1/P-gp表達密切相關，其在裸鼠體內可以保持穩(wěn)定的耐藥性，但是浸潤性降低。本

6、研究為采用MDR1逆轉劑提高腺樣囊性癌化療敏感性提供了理論依據。 第三部分 Survivin在介導腺樣囊性癌細胞多藥耐藥性的產生及凋亡過程中的作用 目的：觀察紫杉醇對腺樣囊性癌親本細胞株ACC-2、肺高轉移細胞株ACC-M、順鉑耐藥細胞株ACC-M/DDP的生物學作用，檢測在此過程中survlvln表達的變化，探討紫杉醇對腺樣囊性癌的作用效果及survivin在介導腫瘤耐藥過程中的作用。 方法：流式細胞儀觀察不同

7、濃度紫杉醇對腺樣囊性癌ACC-2、ACC-M、ACC-M/DDP細胞的凋亡及細胞周期變化，AO/EB熒光染色法觀察細胞凋亡，RT-PCR檢測三種細胞中survivin mRNA的表達及不同濃度紫杉醇作用于ACC-M/DDP后survivin mRNA的表達情況，免疫組化觀察裸鼠移植瘤中survivin蛋白表達。 結果：流式結果顯示小劑量紫杉醇2μg/ml即可對腺樣囊性癌三種細胞株產生不同程度的G2/M阻滯，5μg/ml紫杉醇作用

8、24小時ACC-M/DDP的G2/M期為65.4％±1.1與親本細胞相比顯著增強(P<0.05)。Annexin-V/PI雙染流式細胞術結果顯示紫杉醇對ACC-2、ACC-M和ACC-M/DDP均有不同程度的抑制作用，小劑量紫杉醇(2μg/ml)即可對ACC-M/DDP和ACC-M之間產生差別(P<0.05)。RT-PCR結果顯示survivin基因在三種細胞中均有表達，5μg/ml紫杉醇作用24小時與2μg/ml相比ACC-M/DDP