RNA干擾核糖核酸酶抑制因子表達對膀胱癌BIU-87細胞侵襲和轉移的影響.pdf

1、目的：構建核糖核酸酶抑制因子（RI）基因siRNA干擾質粒，并檢測其對人膀胱癌BIU-87細胞侵襲和轉移的影響。 方法：設計并構建針對RI基因mRNA的2個特異性siRNA表達載體和1個無同源性的陰性對照載體，通過酶切和DNA測序鑒定載體，再轉染BIU-87細胞，通過RT-PCR、western blot和免疫細胞化學檢測干擾的有效性。觀察細胞形態(tài)改變，細胞粘附實驗、劃痕實驗和Transwell法測定細胞粘附、遷移和侵襲能力的變

2、化，分析細胞中基質金屬基質酶的表達，及用激光共聚焦顯微鏡觀察細胞骨架微絲結構。 結果：酶切和測序鑒定質粒構建符合實驗設計；轉入特異性siRNA表達載體后RI蛋白的表達被顯著抑制，對照組未發(fā)生顯著改變；2個干擾實驗組的細胞形態(tài)堆疊嚴重，細胞粘附顯著降低，遷移和侵襲能力顯著增加，基質金屬蛋白酶MMP-2和MMP-9顯著提高，細胞骨架微絲聚集，細胞伸展出片狀偽足。 結論：已成功構建RI基因siRNA干擾質粒，抑制RI基因的表達