Ⅰ、稻曲病菌效應蛋白Uv2169參與致病機理研究Ⅱ、稻曲病菌的糖類偏好性研究.pdf

1、rfIJIIIIIllllllfJIJIlllllJIIIIIIIJlrllliJII『Y3293000⑧叫，I襲掌文學、警2少SICHUAN^GRIcuL丁uRALUNIVERSITY碩士學位論文I、稻曲病菌效應蛋白Uv2169參與致病機理研究II、稻曲病菌的糖類偏好性研究王字秋指導教師r樊晶王文明李燕學科專業(yè)研究方向植物病理學稻曲病菌致病機理2017年6月摘要稻曲病是由Ustilaginoideavirens引起的水稻穗部真菌性病害

2、，目前該病害在世界各大水稻產區(qū)發(fā)病嚴重。稻曲病菌不僅影響稻米產量，人畜誤食稻曲球污染的糧食還會產生中毒反應。雖然最近水稻稻曲病相關報道日益增多，但大多圍繞稻曲病菌病害循環(huán)、生物學特性、侵入水稻方式等展開，目前對于稻曲病菌侵染水稻的分子機制尚不明確，稻曲球的形成也還是一個謎，大量的研究亟待展開。前期我們通過對稻曲病菌侵染水稻前后差異轉錄組數據分析發(fā)現(xiàn)，Uv2169在侵染水稻后上調表達，并通過實驗證明其編碼的蛋白是一個典型的效應蛋白，能誘導

3、細胞死亡、抑制活性氧爆發(fā)等。本研究在此基礎上對Uv2169基因功能進行更為深入的研究。同時稻曲球的形成需要大量的營養(yǎng)物質，為了解開稻曲球形成之謎，本文還對稻曲病菌的糖類偏好性進行了研究，主要取得了以下幾點研究結果：(1)通過外源添加Uv2169siRNA培養(yǎng)稻曲病菌表明，Uv2169受到干涉后菌絲濕重約為對照的一半，稻曲病菌致病力也明顯降低。同時利用農桿菌介導的稻曲病菌遺傳轉化體系，成功得到Uv2169干涉及過表達轉化子，結果表明Uv2

4、169被干涉或過表達后，菌絲形態(tài)會出現(xiàn)較大變化，Uv2169被干涉后稻曲病菌喪失了致病力。(2)成功構建了稻曲病菌侵染水稻穎花的酵母雙雜交cDNA文庫，經檢測文庫質量較好，并使用Uv2169篩選出了56個候選互作蛋白，通過GO注釋發(fā)現(xiàn)許多候選互作蛋白參與核糖體構建，稻曲病菌中的一些候選互作蛋白可調控稻曲病菌生長發(fā)育，水稻中的互作蛋白大多與響應微生物相關。(3)通過使用單一不同糖類培養(yǎng)稻曲病菌發(fā)現(xiàn)水蘇糖能促進稻曲病菌菌絲生長及孢子萌發(fā)。(

5、4)通過轉錄組測序分析水蘇糖及蔗糖培養(yǎng)條件下稻曲病菌的差異表達基因發(fā)現(xiàn)，水蘇糖能調控89個基因差異表達(58個上調，31個下調)，其中有23個轉運相關蛋白，轉運相關蛋白中有4個MFS家族基因被水蘇糖誘導表達。(5)在不同糖類PSA(Potatosucroseagar)培養(yǎng)稻曲病菌條件下、及CB(Czapeksucrosebroth)及CStB(Czapekstachyosebroth)液體培養(yǎng)培條件下，通過qRTPCR檢測幾個候選水蘇糖