腦血管狹窄患者外周血中樹突狀細胞數(shù)量變化的研究.pdf

1、研究背景:
　　 目前基礎和臨床的大量研究資料都證實炎癥反應在動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)的發(fā)生、發(fā)展及由其導致的臨床事件的發(fā)生過程中扮演著決定性的角色[1]。DCs作為激活T淋巴細胞最主要的抗原提呈細胞，擁有著決定T淋巴細胞活化、凋亡及聚集等的重要功能[2]。DC和另外一種擁有抗原提呈功能的細胞——巨噬細胞都起源于骨髓造血干細胞[3]。DC存在于人體的許多器官和組織中，雖然這些DC都具有抗原呈遞功能，但

2、在具體作用方式方面存在明顯差異[4]。根據(jù)DC表面表達的分子標記物可將其分為不同亞型[5]。雖然巨噬細胞也有抗原提呈功能，但更多扮演著吞噬侵入人體的外來物質的“清道夫”，其抗原提呈功能與DC相比要弱的多[6]。與巨噬細胞不同，DC可以感受到人體內環(huán)境的微小變化，是專職的抗原提呈細胞，擁有強大的激活幼稚T淋巴細胞的功能[7]。
　　 1967年，Mosier[8]發(fā)現(xiàn)在抗原和T/B淋巴細胞之間需要一種“輔助細胞”來特異性激活T/B

3、淋巴細胞，并將這種細胞稱為“信息傳遞者”?，F(xiàn)已知道，DC、巨噬細胞和部分B淋巴細胞均可起到這種“信息傳遞者”的作用，而DC是將抗原物質傳遞給T淋巴細胞的最主要的抗原提呈細胞，被稱為“專職抗原提呈細胞”。概括起來，DC的抗原提呈功能就是先在人體外周捕獲侵入人體的抗原物質，繼而遷徙到淋巴器官，將經(jīng)過處理的抗原物質以抗原肽—MHC分子復合物的形式提呈給幼稚T淋巴細胞，從而激活T淋巴細胞，使其分化為對DC所提呈抗原物質具有特異活性的成熟T淋巴細

4、胞。在這一過程中，DC也從抗原捕獲樣式轉換成T淋巴細胞的激活樣式，并在T淋巴細胞帶的周圍定居下來，繼續(xù)起著提呈抗原物質和釋放協(xié)同刺激信號的作用，使T淋巴細胞達到最佳的活化狀態(tài)[9]。
　　 從19世紀就開始了對免疫炎癥機制在動脈粥樣硬化斑塊形成過程中地位的激烈爭論。19世紀中葉德國病理學家Virchow堅稱免疫炎癥機制在AS的形成過程中起著首要的決定性作用，但在當時其觀點并未得到其他病理學家的認可[10]。隨著免疫組織化學染色等

5、現(xiàn)代研究方法的進展，T淋巴細胞等免疫炎癥細胞在動脈粥樣硬化斑塊中逐漸被發(fā)現(xiàn)。在小鼠模型中采用定向敲除編碼協(xié)同刺激信號和促炎癥反應細胞因子的基因后，AS的發(fā)生率顯著下降;同樣，采用轉基因方法增加免疫反應強度則可加速AS。因此，AS是一種慢性免疫炎癥疾病的觀點已得到越來越多的認可[11]。血液中高濃度的膽固醇被認為是啟動這一免疫炎癥反應的首要因素[12]。膽固醇在血液中主要是由低密度脂蛋白(Low-densitylipoprotein，LD

6、L)運輸，這種運輸形式主要是由酯化的膽固醇和三酰甘油外周包裹著磷脂、游離膽固醇和載脂蛋白B100(apolipoproteinB100，ApoB100)外殼構成[13]。ApoB100與細胞外蛋白聚糖相結合可使該復合物運輸形式通過離子通道，從而造成LDL在血管內膜沉積。隨后，LDL可以被內膜中的髓過氧化物酶、脂氧合酶以及內膜中的其他氧化物質氧化，形成氧化型LDL(oxidized-LDL，oxLDL)，而DC可以捕獲oxLDL然后將其遞

7、呈給T淋巴細胞，從而參與AS斑塊的發(fā)生和發(fā)展。實驗研究證實，在載脂蛋白E基因敲除的小鼠模型中注入負載oxLDL的DC可導致AS的發(fā)生[14]。在小鼠中，膽固醇可觸發(fā)血管內膜下DC對脂質的攝取，從而引起最初的泡沫細胞和脂質條紋的形成[15，16]，而活化的T淋巴細胞可促使巨噬細胞和平滑肌細胞吞噬脂質，形成更多的泡沫細胞并加速動脈粥樣硬化斑塊的形成[17]。
　　 研究表明，冠心病患者外周血DC的數(shù)量和功能均出現(xiàn)顯著異常[18]，C

8、D11c+mDC數(shù)量顯著減少，而pDC數(shù)量無顯著變化，mDC/pDC≥4對于區(qū)分急性冠脈綜合征和穩(wěn)定性心絞痛具有重要意義[19]。另外，冠心病患者血漿FMS樣絡氨酸激酶3配體(FMS-liketyrosinekinase3ligand，F(xiàn)lt3L)水平顯著降低，并與DC數(shù)量存在顯著相關性，而粒細胞（—）巨細胞集落刺激因子(granulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactor，GM-CSF)水平無顯

9、著變化。作為對脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)的反應，mDC可上調CD83和CD86表達，但CC趨化因子7受體(CCchemokinereceptortype7，CCR-7)表達和IL-12分泌無變化;相反，患者低表達CD83和CCR-7，咪喹莫特(imiquimod)過夜孵育CD83表達和INF-α分泌仍無顯著上調。這些研究結果表明，冠心病患者外周血mDC功能正常，而pDC功能下降。在腦血管AS病變的發(fā)生和發(fā)展過

10、程中，DC同樣發(fā)揮著重要的作用。相關研究證實，頸動脈壁存在DC，不穩(wěn)定斑塊中的DC數(shù)量是穩(wěn)定斑塊的10倍，而且DC數(shù)量與頸動脈AS導致的卒中風險密切相關[20]。不過與冠狀動脈等其他部位的動脈相比，腦血管（特別是顱內血管）的解剖學結構存在其特殊性。與顱外血管相比，顱內血管的內彈力層和外膜結構均不發(fā)達。目前，有關DC在腦血管AS病變過程中發(fā)揮怎樣作用的研究并不充足，因此DC及其各個亞群在腦血管AS病變過程中的作用尚需進一步研究。
　

11、　 目的:
　　 如果免疫炎癥反應的確在AS的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，那么作為人體最主要的抗原提呈細胞，DC的數(shù)量和功能在外周血中也應發(fā)生一定的變化，也就是說在由AS導致的腦血管狹窄患者的外周血中DC的數(shù)量和功能必將發(fā)生相應的變化，并且腦血管狹窄程度越重這種變化也將越顯著性。闡明DC在由AS導致的腦血管狹窄患者的外周血中數(shù)量的變化規(guī)律，可從側面驗證免疫炎癥反應在AS的發(fā)生和發(fā)展過程中的作用，并與冠心病患者外周血中DC的變

12、化規(guī)律相互驗證，為建立針對DC防治AS的可能策略提供理論依據(jù)。
　　 研究方法及分組:
　　 因此我們選取2009年11月至2010年2月、2010年8月至2010年12月間在南方醫(yī)科大學珠江醫(yī)院神經(jīng)內科住院病人63例作為研究對象，嚴格控制入組標準，經(jīng)過篩選，認為導致腦血管狹窄的原因為AS。入選患者均行DSA檢查，觀察血管包括:頸總動脈、頸內動脈和椎動脈的顱外段、鎖骨下動脈的椎動脈開口以近端、大腦中動脈M1段、椎動脈顱內

13、段、基底動脈、大腦后動脈P1段及大腦前動脈A1段。腦血管狹窄程度測量方法按照NASCET方法進行測量。對各觀察動脈分別進行評定，多血管存在狹窄者根據(jù)狹窄程度最重的血管進行分組。根據(jù)DSA檢查結果將患者分為4組:DSA檢查腦血管未見狹窄者作為正常對照組，DSA顯示腦血管直徑狹窄程度＜70％的患者作為輕中度狹窄組，DSA顯示腦血管狹窄程度≥70％者作為重度狹窄組，腦血管支架植入術后患者作為支架術后組。研究對象在珠江醫(yī)院介入中心進行腦血管造影

14、檢查，術后由不知情的專門從事腦血管造影檢查及分析的人員依據(jù)測量結果對腦血管狹窄程度進行評估，于腦血管造影術前空腹抽取外周動脈血4ml（EDTA管，肝素1mg:5ml抗凝）。并記錄入組病人的性別、年齡、身高、體重、血壓、吸煙、飲酒、糖尿病、總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇等檢驗指標。對獲取標本用流式細胞儀檢測外周血DCs亞型的比例。統(tǒng)計學數(shù)據(jù)采用SPSS13.0進行分析。
　　 結果:
　　 外周

15、血中骨髓樣樹突狀細胞(myeloiddendriticcells，mDCs)的比例在各組間比較存在統(tǒng)計學差異(P＜0.0001)，類漿樣樹突狀細胞(plasmacytoiddendriticcells，pDCs)的比例在各組間比較沒有統(tǒng)計學差異(P=0.065)。mDCs在各組間比較結果:正常對照組與輕中度狹窄組比較沒有統(tǒng)計學差異(P=0.275)，正常對照組與重度狹窄組比較有統(tǒng)計學差異(P=0.040)，正常對照組與支架術后組比較沒有

16、統(tǒng)計學差異(P=0.473)，輕中度狹窄組與重度狹窄組比較有統(tǒng)計學差異(P＜0.0001)，輕中度狹窄組與支架術后組比較沒有統(tǒng)計學差異(P=1.000)，重度狹窄組與支架術后組比較沒有統(tǒng)計學差異(P=0.297)。因此在本實驗中mDCs的比例在由AS導致的不同腦血管狹窄程度患者外周血中存在重新分布的現(xiàn)象;pDCs的比例沒有顯著性變化;支架術后病人外周血中mDCs及pDCs的比例均沒有顯著性變化。
　　 結論:
　　 這一