CAV-1對人臍靜脈內皮細胞中MCP-1表達的影響.pdf

1、單核細胞趨化蛋白-1（MCP-1）的表達增加是內皮功能紊亂的重要表現(xiàn)之一，氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）可以通過血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體（LOX-1）介導內皮細胞MCP-1的表達增加，若預先加入反義LOX-1 mRNA則可抑制上述過程，表明LOX-1在介導ox-LDL誘導的內皮細胞中MCP-1表達的信號轉導途徑中發(fā)揮重要作用。然而LOX-1的結構分析顯示LOX-1胞內段無SH2域，且不與G蛋白偶聯(lián)，卻可激活酪氨酸蛋白激酶途徑及G蛋

2、白介導的PKC信號途徑。因此，LOX-1如何介導信號跨膜轉導的機制尚不清楚。由于多種信號分子聚集在Caveolae區(qū)，CAV-1是其信號轉導中心,可介導多種受體的信號轉導，且本課題組通過激光共聚焦檢測到LOX-1與CAV-1在中國倉鼠卵巢細胞（CHO）上共定位，由此我們推測，CAV-1可能協(xié)助LOX-1介導ox-LDL誘導內皮細胞MCP-1的表達增加。 本實驗采用激光共聚焦技術，檢測到培養(yǎng)的人臍靜脈內皮細胞中LOX-1與CAV-

3、1共定位。采用RT-PCR和Western blot檢測cav-1 mRNA及蛋白水平，以此篩選出一對有效的特異性cav-1 siRNA。在上述基礎上，將培養(yǎng)的人臍靜脈內皮細胞分為以下三組：空白對照組（正常培養(yǎng)基），ox-LDL刺激組（未轉染特異性cav-1 siRNA）及cav-1 siRNA組（轉染體外化學合成的特異性cav-1 siRNA24 h后ox-LDL刺激24 h），采用RT-PCR和ELISA方法檢測MCP-1 mRNA

4、及蛋白水平的變化。結果發(fā)現(xiàn)與空白對照組相比，ox-LDL刺激組MCP-1的mRNA和蛋白表達量顯著增加（P<0.05）；而cav-1 siRNA組可顯著降低ox-LDL誘導的MCP-1的表達量（P<0.05）。 我們的結果表明有效抑制CAV-1的表達可以下調ox-LDL誘導的內皮細胞MCP-1的表達，提示CAV-1在ox-LDL誘導內皮功能紊亂的信號傳遞途徑中可能發(fā)揮重要作用。我們將進一步采用突變體構建、FRET等技術證實CAV