完全人源化基因工程抗體anti-HBsAg Fab原核體系表達純化工藝路線放大可行性研究.pdf

1、第一軍醫(yī)大學博士學位論文完全人源化基因工程抗體antiHBsAgFab原核體系表達純化工藝路線放大可行性研究姓名：鄭大勇申請學位級別：博士專業(yè)：腫瘤學指導教師：羅榮城20040526目的：13方法：摘要在搖瓶水平上對可影響大腸桿菌生長及外源蛋白表達的因素進行多因素分析，明確這些影響因素對菌體生長及表達的影響程度。在BioFl0110型發(fā)酵罐中摸索高密度發(fā)酵方法，確定合理的發(fā)酵路線：探索具有可放大的、非特異性純化目的抗體片段的工藝路線。1

2、通過預實驗及文獻回顧，確定出需實驗考察的可能影響大腸桿菌生長及外源蛋白表達的8個因素。采用PlaekeaBurman多因素兩水平分析法和BoxBehnken響應面分析法對這8個因素進行多因素交互作用的實驗設計，隨后按照設計要求在搖瓶水平上進行實驗：2在BioFloll0型發(fā)酵罐中考察不同的補料模式可能實現(xiàn)的發(fā)酵水平及蛋白表達水平?？疾?種補料模式：恒速補料、指數(shù)補料及溶氧反饋控制補料。3在純化路線設計方面，先以經(jīng)過Ni2敖合層柝的抗體為

3、“標準品”，摸索陽離子交換柱和琉水層析柱的純化條件；隨后按照自行設計的組合層析策略，將獲得的菌體凍融上清經(jīng)預處理后按照弱陽離子CM柱、疏水phenyl柱及凝膠過濾$200柱的順序依次純化：最后將得到的抗體以非競爭性ELISA法測定與乙肝表面抗原的親和活性。結(jié)果：1在對影響基因工程重組菌Fab／pBAD／glllTOPl0生長特性的多因素分析中，對可能影響菌體生長的8因素兩水平分析后重要性排列的結(jié)果依次為：發(fā)酵起始pH、微量元素、體系載液