HCV多表位抗原疫苗的免疫學(xué)評價.pdf

1、丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)是一種嚴(yán)重危害人類健康的病毒。丙型肝炎由丙型肝炎病毒引起。目前全球約有1.7億～2.0億HCV感染者，此感染者中70％～85％可發(fā)展成為慢性感染，病程可達(dá)20～30年，約有20％可發(fā)展成肝硬化，其中又有20％可轉(zhuǎn)化為肝細(xì)胞癌。目前對于HCV慢性感染尚無高效的特異性治療方法，僅局限于采用療效欠佳的聚乙二醇干擾素α和利巴韋林等抗病毒途徑，但副作用較大，因此研制HCV疫苗對于控制HCV

2、流行具有重要意義。由于HCV基因序列存在高度變異性，導(dǎo)致HCV相似株的存在和免疫逃避現(xiàn)象，使HCV得以逃避宿主免疫機(jī)制，造成HCV持續(xù)感染，同時不論在體內(nèi)還是體外，HCV感染后均能產(chǎn)生中和抗體，但這些抗體具有嚴(yán)格的毒株特異性，對變異毒株缺乏有效的交叉中和保護(hù)作用，因此研制有效的HCV疫苗必須能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對不同HCV株的交叉免疫保護(hù)作用。
　　 本研究結(jié)合NS區(qū)相關(guān)抗原表位在抗HCV免疫反應(yīng)中具有重要意義的研究結(jié)果，在前期七

3、表位序列基礎(chǔ)上增加了三個具有保守意義的NS區(qū)抗原表位。根據(jù)HCV免疫反應(yīng)的主要效應(yīng)機(jī)制為細(xì)胞免疫，以T細(xì)胞表位為主，B細(xì)胞表位為輔，分別從HCV六個基因型中選取具有代表意義的保守表位，理論上可以代表HCV的基本抗原結(jié)構(gòu)，同時考慮中國人種基因頻率較高的HLA分子限制性HCV抗原表位。根據(jù)現(xiàn)有資料，本研究在十個表位之間使用了鉸鏈區(qū)作為間隔，以保證各表位有充分的空間旋轉(zhuǎn)可能。
　　 該重組抗原表位多肽轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α后，通過篩選獲

4、得高效表達(dá)重組蛋白的工程菌。表達(dá)產(chǎn)物以包涵體形式存在，包涵體經(jīng)洗滌溶解復(fù)性及一系列純化步驟后，獲得純度較高的目的蛋白。Westernblot結(jié)果顯示純化的重組抗原表位多肽具有良好的抗原反應(yīng)性。重組抗原表位多肽免疫小鼠和恒河猴后，ELISA實(shí)驗檢測結(jié)果顯示，該重組抗原表位多肽在小鼠和恒河猴體內(nèi)獲得了較高的抗體免疫水平。
　　 本研究成功將重組抗原表位多肽HCVe在大腸桿菌DH5α中高效表達(dá)，對蛋白表達(dá)、復(fù)性純化等實(shí)驗條件進(jìn)行了初步