褪黑素及其受體拮抗劑對(duì)哮喘小鼠模型氣道炎癥和氣道重構(gòu)的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、背景： 支氣管哮喘(Bronchialasthma)是一種呼吸系統(tǒng)常見(jiàn)的慢性氣道炎癥性疾病，是多種炎癥細(xì)胞(如嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、T細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、氣道上皮細(xì)胞等)和細(xì)胞組分共同參與的氣道慢性炎癥性疾患。氣道慢性炎癥所引發(fā)的氣道反復(fù)損傷、修復(fù)，可導(dǎo)致氣道結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，稱為氣道重塑，其特點(diǎn)包括氣道壁增厚，上皮下纖維化，黏液化生，成纖維細(xì)胞增生，肌細(xì)胞增生和肥大，上皮增生和血管改變?nèi)缪芡ㄍ感栽黾雍托卵苌伞獾乐厮芸赡軐?dǎo)致

2、氣道高反應(yīng)性和可逆性或不可逆性氣流阻塞。 目的： 1．觀察氣道炎癥和氣道重塑在小鼠慢性哮喘模型中的變化。 2．早期褪黑素干預(yù)對(duì)哮喘小鼠氣道炎癥和氣道重塑發(fā)生、發(fā)展的影響。 3．褪黑素受體拮抗劑對(duì)氣道炎癥和氣道重塑的干預(yù)作用 方法： SPF級(jí)雄性Balb／c小鼠95只，6-8周齡，體重25～28克。小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為對(duì)照組(NS／NS組)、哮喘組(OVA／OVA組)、MT治療組(

3、MT／OVA組)、激素治療組(DXM／OVA組)、MT受體拮抗劑組(LUZ／OVA組)。第0天、第7天‘I~／OVA、MT／OVA、DXM／OVA、LV2/OVA組腹腔注射OVA懸液0．4MT(OVA100μg，硫酸鋁鉀1．6mg溶于生理鹽水)，NS／NS組則予腹腔注射生理鹽水0．4MT。第14天，小鼠置于霧化吸入箱內(nèi)(50cm×27cm×25cm)，NS／NS組霧化吸入生理鹽水30分鐘，謫／OVA、MT／OVA、DXM／OVA組霧化吸

4、入1％OVA30分鐘，隔天一次，每周3次。各組在霧化吸入前半小時(shí)予腹腔注射BrdU，劑量50mg&g，每周3次。同時(shí)在每次霧化前半小時(shí)MT／OVA組予腹腔注射MT，劑量10mg／Kg,DXM／OVA組予腹腔注射DXM，劑量1．5mg／kg，LUZ／OVA組予腹腔注射LUZ，劑量30mg／Kg；NS／NS、NS／OVA組則腹腔注射生理鹽水。除LUZ／0VA組外，其它組注射藥物時(shí)間選擇在每天上午8點(diǎn)，而LUZ／OVA組只做2周急性期組，腹腔

5、注射LUZ時(shí)間選擇在凌晨零點(diǎn)。注射MT和LUZ時(shí)應(yīng)避光，考慮到MT的晝夜節(jié)律性，早8點(diǎn)是MT的分泌低谷，在體內(nèi)MT濃度最低時(shí)給MT，而夜間零點(diǎn)是MT分泌最高峰，在MT濃度最高時(shí)給予LUZ。前四組在霧化的第2、4、8周，LUZ／OVA組在霧化的第2周，于末次霧化24小時(shí)后處死小鼠取材。肺組織石蠟切片作蘇木素伊紅染色(HE)、Masson三原色法染膠原纖維、過(guò)碘酸一無(wú)色品紅法(PAS)染氣道杯狀細(xì)胞，以及BrdU免疫組織化學(xué)染色，借助Met

6、aMorph圖像分析軟件測(cè)量單位氣道面積炎性細(xì)胞數(shù)目、支氣管基底膜周徑(Pbm)、上皮粘膜層面積(WAmuc)、平滑肌面積(WAm)、氣管內(nèi)壁面積(WAi)，膠原面積(Wc01)、杯狀細(xì)胞的比例、氣管基底膜(／lmm)上BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目。 結(jié)論： 1、過(guò)敏原(OVA)致敏及反復(fù)霧化激發(fā)小鼠所引起的氣道病理改變可反映出哮喘患者的氣道炎癥和氣道重塑。 2、氣道炎癥和氣道重塑在哮喘發(fā)病早期即可出現(xiàn)，在一定時(shí)期內(nèi)，并