腦室周圍白質軟化腦內氨基酸遞質動態(tài)變化—活體微透析研究.pdf

1、目的：利用微透析(microdialysis,MD)技術觀察腦室周圍白質軟化(PVL)早產鼠腦內氨基酸遞質動態(tài)變化,探討興奮毒性在PVL發(fā)生發(fā)展中的作用。 方法： 1)3-硝基丙酸腦內注射誘導PVL模型建立：新生5天(postnatal day 5,P5)SD大鼠80只,隨機分成NPA組(40只)和PBS組(40只),腦立體定位儀定位于左側腦室上方胼胝體,分別注入等量3-NPA和PBS,實驗鼠由母鼠代養(yǎng)至P6～P30不等

2、。64只實驗鼠(每組各32只)于P6,P7,P8,P14處死,灌注固定取腦,取不同腦冠狀面作冰凍切片,作HE染色(P6、P7、P8、P14)及少突膠質細胞O4(P6、P7)、MBP(P8、P14)免疫組織化學染色,16只實驗鼠(每組各8只)于P28～P30作神經行為學測試。 2)微透析實驗：3-硝基丙酸(3-NPA)腦內注射復制P5 SD大鼠PVL模型,利用微透析技術,于造模前、造模后15min、30min、45min、60mi

3、n、75min、90min收集透析液,收集完畢移除設備,實驗鼠由母鼠帶養(yǎng)至P6～P14不等。經高效液相色譜(HPLC)定量分析透析液中谷氨酸(glutamate,Glu)、天冬氨酸(aspartic acid,Asp)、甘氨酸(glycine,Gly)、γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)含量,計算分析興奮毒性指數(excitotoxic index,EI)變化。實驗鼠于P6,P7,P8,P14處死,灌注固定

4、取腦,取不同腦冠狀面作冰凍切片,作HE染色。 結果： 1)在3-硝基丙酸腦內注射誘導新生鼠腦室周圍白質軟化模型的實驗中,HE染色顯示P6、P7、P8 NPA組皮質下及腦室周圍白質出現不同程度疏松及液化灶,P14出現腦室擴大,腦室指數較PBS組高,差異具顯著性,腦皮質無明顯變化；O4染色示NPA組陽性細胞較PBS組明顯減少,差異具顯著性；MBP免疫染色示NPA組平均光密度值較PBS組低,差異具顯著性；神經行為學檢測顯示NP

5、A組出現明顯的神經行為學異常,與PBS組比較有明顯差異。 2)微透析實驗顯示,細胞外液中Glu與Asp濃度在造模后15min～45min升高,明顯高于造模前水平,隨后恢復到造模前水平；Gly濃度在造模后15min～75min顯著升高,90min恢復至造模前水平；GABA濃度在造模后15min～30min時明顯高于造模前水平,45min后恢復至造模前水平；反映興奮性神經遞質與抑制性神經遞質平衡綜合指數的EI值在造模后15min～7

6、5min明顯增高,90min恢復至造模前水平。 結論： 1)3-NPA腦內注射誘導P5新生鼠PVL模型符合腦室周圍白質軟化的神經病理學及神經行為學特征,可作為相關疾病研究的可靠模型。 2)氨基酸遞質在PVL的損傷過程中出現規(guī)律性變化：無論是興奮性氨基酸還是抑制性氨基酸在損傷的早期階段都出現顯著增高,隨后恢復至損傷前的水平；反映興奮性神經遞質與抑制性神經遞質平衡綜合指數的EI值亦表現出同樣的規(guī)律性。這表明興奮毒性作