CTLA-4-IgG4融合蛋白在CHO-DG44細胞中的高效表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：研究在中華倉鼠卵巢細胞(Chinese hamster ovary cell，CHO)真核表達系統(tǒng)中CTLA-4/IgG4融合蛋白的表達，將質(zhì)粒pMMGR和pMM-CTLA4-IgG4/WG共轉(zhuǎn)染CHO/DG44細胞；純化所表達的CTLA-4/IgG4G4融合蛋白，并從中篩選出表達量最高的陽性克隆細胞，為CTLA-4/IgG4的功能研究和臨床應用奠定基礎。 方法：以限制性酶Nde Ⅰ和Not Ⅰ分別對質(zhì)粒pMMGR和質(zhì)粒p

2、MM-CTLA4-IgG4/WG進行限制性酶切消化使其線性化，將線性化的質(zhì)粒pMMGR和pMM-CTLA4-IgG4/WG共轉(zhuǎn)染CHO/DG44細胞，經(jīng)G418和MTX篩選14天后，對陽性克隆進行無血清懸浮培養(yǎng)，Westernblot檢測細胞培養(yǎng)液中CTLA-4/IgG4融合蛋白的表達，篩選出高效穩(wěn)定表達CTLA-4/IgG4融合蛋白的CHO細胞；Protein A-Agarose親和層析純化所表達的CTLA-4/IgG4融合蛋白；SD

3、S-PAGE電泳、Western印跡等對純化的CTLA-4/IgG4融合蛋白的相對分子質(zhì)量、純度、抗原特異性進行生物學鑒定。 結(jié)果：篩選出了能高效穩(wěn)定表達CTLA-4/IgG4融合蛋白的CHO細胞；純化后的CTLA-4BgG4融合蛋白在SDS-PAGE電泳后出現(xiàn)一條與預期分子量大小相符的蛋白條帶；該蛋白能與羊抗人IgG-HRP抗體特異結(jié)合。 結(jié)論：獲得了能夠表達CTLA-4/IgG4融合蛋白的陽性克隆CHO/DG44細胞

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