脂多糖對大鼠肺微血管內皮細胞血管緊張素轉換酶2表達的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：研究血管緊張素轉換酶2 (angiotensin converting enzyme-2，ACE2)在大鼠肺微血管內皮細胞 (rat pulmonary microvascular endothelial cell，RPMVEC)上的表達，觀察脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)對RPMVEC的損傷作用及ACE2表達的影響。 方法：采用RT-PCR、Westem blot和免疫組化方法，檢測體外培養(yǎng)的RP

2、MVEC是否表達 ACE2；引入內參半定量分析10μg/ml的LPS孵育RPMVEC后不同時相點ACE2表達的變化；用MTT比色法測定不同劑量LPS(0.1μg/ml-100μg/ml) 作用后RPMVEC在540nm處的吸光度，以反映細胞存活率和代謝活性的變化。 結果：1．體外成功分離培養(yǎng)出RPMVEC，并經形態(tài)學及FITC-BSI結合實驗證實。2．RT-PCR法從細胞總RNA中擴增出ACE2的特異性條帶，Western bl

3、ot法在細胞蛋白提取液中檢測出ACE2的蛋白印跡條帶，免疫組化實驗表明ACE2免疫組化反應產物主要位于RPMVEC的胞膜和胞漿。3．以 10μg/ml的LPS處理RPMVEC后，用RT-PCR及Western blot法檢測ACE2的變化，在3h、12h、24h時相點，ACE2 mRNA和蛋白的表達量均明顯低于對照組。4．MTT比色實驗表明，0.1μg/ml-100μg/ml濃度的LPS作用RPMVEC后，細胞存活率和代謝活性顯著降低，

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