實時熒光定量PCR檢測大腸癌腹腔微轉移及其臨床意義的研究.pdf

1、大腸癌為常見多發(fā)的消化道惡性腫瘤,隨著生活水平的提高和飲食習慣的改變,大腸癌的人群患病率有所上升,并有年輕化趨向.大腸癌病人盡管接受了以手術為主的根治術,但臨床上仍有50﹪的大腸癌患者死于術后的腫瘤局部復發(fā)和轉移,成為手術治療失敗的主要原因.因此應用先進的分子生物學技術、建立定量熒光RT-PCR方法檢測大腸癌腫瘤標志物、術后轉移的早期診斷受到高度重視. 本項研究應用實時熒光定量PCR技術檢測大腸癌腹腔內游離癌細胞及探討其臨床意義

2、.從2003年5月至2004年1月,收集在日本愛知癌癥中心手術81例大腸癌病例,應用隨機引物和寡核苷酸引物,檢測大腸癌病人手術腹腔沖洗液中游離細胞的癌胚抗原(CEA)mRNA和細胞角蛋白20(CK-20)mRNA雙重特異性標志物,并檢測3磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)mRNA為內參因子.并在羅氏的實時熒光定量PCR(LightCycler)上進行定量分析.樣本同時進行常規(guī)細胞學檢查.所有病例術后經過平均為1年的隨訪. 研究結果表

3、明:CEA mRNA和CK-20 mRNA的陽性率和值均與腫瘤的侵潤度(T),分期以及淋巴結轉移相關.在一個合理界定值上,CEA和cK-20檢測的敏感度與特異度均為100﹪和100﹪,而常規(guī)的細胞學檢查則為 33﹪和100﹪.CFA或CK20的水平異常與大腸癌手術后無瘤生存率密切相關,通過實時熒光定量PCR方法,測定腹腔沖洗液中CEA和CK20的值,顯示出高于常規(guī)細胞學檢查的特異性和敏感性,是檢測大腸癌腹腔微轉移的有效方法.為臨床治療大

4、腸癌分子水平的診斷、以及隨后的對于具有高危因素病人的輔助化療提供了一個新的策略. 實時熒光定量RT-PCR轉移和復發(fā)仍然是影響胃癌患者預后的重要因素,腫瘤細胞在腹腔、淋巴結、外周血及骨髓中的微轉移是腫瘤轉移和復發(fā)的基礎. 以CEA mRNA和CK-20mRNA為靶基因,實時熒光定量RT-PCR法檢測微轉移腫瘤細胞,是近年來該領域研究的焦點.本文擬從方法學、檢測結果及臨床意義等方面對實時熒光定量RT-PeR檢測胃癌患者腹腔沖洗液游

5、離細胞CEA和CK-20基因的研究進展加以綜述. 方法：對從1998-2006年3504例在浙江省腫瘤醫(yī)院接受治療人腸癌病例,以13年為一年份組別進行同顧性分析,所有病例均經過病歷確診. 結果：2004-2006年段與1998-2000年段比較,人腸癌收治率上升了98﹪,平均每年上升10.9﹪.70歲以上的高齡人腸癌病例發(fā)病上升明顯,2004-2006年占到同期病例14﹪:中何發(fā)病年齡為54.5歲:男女比例為:1.19: