肝X受體介導腎小球系膜細胞膽固醇外流.pdf

1、慢性腎衰竭是一種嚴重威脅人民健康的疾病，腎小球硬化是慢性腎衰竭的重要致病因素。對于腎小球硬化機制的研究表明，腎小球局部脂質代謝異?？赡茉谀I小球硬化的發(fā)生過程中有重要作用，旨在降低循環(huán)和腎臟局部脂質負荷的方法也發(fā)現可以減輕和延緩腎小球硬化的發(fā)生和發(fā)展，因而闡明腎臟脂質代謝機制對預防和治療腎小球硬化具有重要的意義。已有的研究表明，脂質聚集在系膜細胞中會導致其轉變成泡沫樣細胞，引起腎小球硬化而喪失原有的功能，因此系膜細胞中的脂質代謝調節(jié)在腎臟

2、中顯得尤為重要。 本研究旨在探討肝X受體(liverXreceptor，LXR)在小鼠腎臟系膜細胞脂質代謝中的作用及機制。我們的研究發(fā)現LXR特異性激動劑TO901317刺激培養(yǎng)的家兔系膜細胞后，轉染的ABCA1熒光素酶報告基因活性增加。而用TO901317處理培養(yǎng)的小鼠系膜細胞24小時后，基因芯片結果也顯示ABCA1基因表達被上調。因此我們推測在小鼠腎小球系膜細胞中，LXR可能通過上調ABCA1的表達，發(fā)揮調節(jié)脂質代謝的作用。

3、另外，由于ABCG1也是LXR的靶基因，且同ABCA1以相似的方式調節(jié)機體膽固醇的代謝，所以同時觀察了在小鼠腎小球系膜細胞中LXR對ABCG1的調節(jié)作用。 方法：LXR具有兩種亞型LXRα和LXRβ，為了評估LXRα和LXRβ在腎臟的表達，我們用反轉錄-多聚酶鏈式反應(RT-PCR)分析了腎臟、新鮮分離的腎小球及系膜細胞中兩種亞型的mRNA表達水平。另外我們也提取了腎臟核蛋白和系膜細胞總蛋白，并使用免疫印跡(Westernblo

4、tting)實驗方法研究了在腎臟和腎小球系膜細胞中LXRα和LXRβ蛋白水平的表達。此外，我們建立了原代小鼠系膜細胞的培養(yǎng)方法并用1-5代系膜細胞，給予LXR激動劑TO901317(10μmol/L)或溶劑二甲基亞楓(DMSO)處理24小時，進行以下幾個方面的研究：(1)實時熒光定量PCR(Quantitativereal-timePCR)觀察ABCA1和ABCG1在TO901317刺激后表達水平的變化。(2)轉染人ABCA1熒光素酶報

5、告基因方法研究TO901317對ABCA1啟動子活性的影響。(3)Westernblotting觀察系膜細胞轉染了LXRα腺病毒后再予以TO901317刺激，ABCA1蛋白水平的變化。(4)[3H]標記膽固醇方法測量系膜細胞予以TO901317處理后游離膽固醇的外流量。 結果：首先我們分別從mRNA和蛋白水平證實LXR兩種亞型在小鼠腎臟、腎小球、系膜細胞中均有表達。LXR激動劑TO901317(10μmol/L)處理系膜細胞后，

6、實時熒光定量PCR結果顯示ABCA1mRNA水平增加約2.6倍(p＜0.01，n=6)。同時我們觀察了ABCG1mRNA水平的變化，同對照組相比，TO901317也使其表達增加了約2.5倍(p＜0.05，n=3)。為了進一步研究LXR激動劑上調ABCA1mRNA水平的分子機制，系膜細胞轉染了人ABCA1熒光素酶報告基因后，再予以TO901317(10μmol/L)處理24小時，結果同對照組相比，實驗組ABCA1啟動子活性即熒光值明顯增加

7、(p＜0.01，n=6)。接下來我們在系膜細胞中轉入LXRα腺病毒使其過度表達LXRα24小時后，再給予TO901317處理24小時，免疫印跡分析顯示TO901317能在蛋白水平增加ABCA1的表達。用[3H]標記膽固醇對系膜細胞膽固醇外流的研究表明TO901317能夠增加游離膽固醇的流出，加入ApoAI后外流的游離膽固醇明顯增多。 結論：小鼠系膜細胞中存在LXRα和LXRβ的基礎表達，LXR激動劑不僅可以上調ABCA1的表達，