Resistin及其結合多肽（RBP）干預脂肪組織、脂肪細胞的功能研究.pdf

1、現(xiàn)已知，胰島素抵抗是2型糖尿病的重要特征和前提，而肥胖則是2型糖尿病的一個重要危險因素。長期以來人們一直認為肥胖患者脂肪細胞功能異常與胰島素抵抗的形成密切相關，并試圖從脂肪組織中篩選胰島素抵抗候選基因作為2型糖尿病防治的靶標。Resistin(簡稱Retn)，是2001年Steppan等人通過小鼠脂肪組織差減雜交實驗發(fā)現(xiàn)的一種胰島素抵抗候選基因。該基因較特異地表達于白色脂肪組織中，肥胖小鼠體內的血漿Resistin水平顯著升高，并引起小

2、鼠胰島素抵抗，因此Resistin被認為是聯(lián)結肥胖和糖尿病的一個中介分子。 Resistin結合多肽(ResistinBindingPeptide，RBP)是本研究小組于2003年通過噬菌體表面展示技術(phagedisplay)篩選出的可以與Resistin結合的蛋白，并通過RBP過表達技術發(fā)現(xiàn)RBP可以拮抗Resistin促進3T3-L1脂肪細胞分化的作用，提示RBP可能成為Resistin的拮抗劑，從而在抗糖尿病多肽藥物開

3、發(fā)中發(fā)揮著重要作用。 然而，有關Resistin與RBP的功能研究均不十分徹底，為深入探討Resistin在胰島素抵抗中的作用以及RBP對其功能的影響，本文分別以體外培養(yǎng)的脂肪組織、脂肪細胞為研究工具，通過兩部分研究，來闡明Resistin致胰島素抵抗的可能機制及RBP對Resistin功能的影響。 第一部分：Resistin及RBP干預大鼠白色脂肪組織的功能研究 目的：①觀察大鼠重組Resistin蛋白(rRe

4、sistin)對脂肪組織脂質分解、內分泌功能的影響；②探討RBP對rResistin上述功能的影響。 方法：采用臺盼藍排斥試驗，確定理想的RBP干預濃度；建立大鼠脂肪組織體外培養(yǎng)的方法，在此基礎上分別或共同采用rResistin(30ng/ml)、不同濃度RBP(10-12mol/l、10-10mol/l、10-8mol/l)干預24小時；采用全自動生化儀終點法觀察干預前后脂肪組織freefattyacids(FFAs)的含量；

5、ELISA法檢測脂肪組織培養(yǎng)上清中adiponectin、TNF-α的蛋白含量；采用RT-PCR技術檢測培養(yǎng)脂肪組織中adiponectin、TNF-α基因的mRNA表達水平。 結論①大鼠重組Resistin蛋白可顯著影響白色脂肪組織的脂質代謝和內分泌功能；②RBP可有效拮抗Resistin的作用。 第二部分：Resistin及RBP干預3T3-L1脂肪細胞的功能研究 目的：①觀察Resistin對3T3-L1脂

6、肪細胞分化、脂代謝、葡萄糖轉運體4(glucosetransporter4，GLUT-4)基因mRNA表達的影響；②探討RBP對Resistin上述功能的影響。 方法：①構建大鼠resistin真核表達載體，轉染3T3-L1前體脂肪細胞，獲得穩(wěn)定表達resistin基因的細胞株；②采用油紅O染色，觀察脂肪細胞分化及脂質積聚情況；③采用RT-PCR技術，檢測脂肪細胞分化標志基因(pref-1、C/EBPα、FAS)及GLUT-4基