SPARC、TGFβ1和Endoglin在肺癌中的表達(dá)及其與血管生成機(jī)制的研究.pdf

1、本課題采用組織芯片技術(shù)、免疫組織化學(xué)技術(shù)（immunohistochemistry, IHC）和原位雜交技術(shù)（In situ hybridization, ISH）檢測肺癌(lung cancer)組織和癌旁肺組織中富含半胱氨酸的酸性蛋白（secreted protein, acidic and rich in cysteine, SPARC)、轉(zhuǎn)化生長因子β1（transforming growth factorβ1, TGFβ1）、

2、Endoglin的表達(dá)，探討SPARC、TGFβ1、Endoglin因子在肺癌組織與癌旁肺組織中的表達(dá)及其與患者臨床病理特征的關(guān)系；探討SPARC、TGFβ1、Endoglin因子在肺癌組織中表達(dá)的相互關(guān)系及與新生血管之間關(guān)系。
　　收集54例人肺癌及2例癌旁肺組織標(biāo)本，選擇其微血管形態(tài)不同的血管密集處制備組織芯片；在此基礎(chǔ)上采用免疫組化染色法分別進(jìn)行CD34、Endoglin和α-SMA標(biāo)記，觀察微血管管壁組成細(xì)胞的免疫表型與其

3、不同形態(tài)特征之間的關(guān)系，選擇出新生血管特異性標(biāo)記物。
　　采用免疫組織化學(xué)技術(shù)和原位雜交技術(shù)方法檢測71例肺癌組織，30例癌旁肺組織中SPARC蛋白與SPARC mRNA、TGFβ1蛋白與TGFβ1 mRNA及Endoglin蛋白的表達(dá)情況；分析其與患者的臨床病理特征的關(guān)系以及三者之間表達(dá)的關(guān)系；分析檢測SPARC、TGFβ1、Endoglin表達(dá)的一致性。
　　SPARC蛋白、TGFβ1蛋白在71例肺癌組織中的陽性表達(dá)率分

4、別為56.34％(40/71)、60.56%(43/71)，30例癌旁肺組織中的陽性率分別為：20%(6/30)、30%(9/30)，Endoglin蛋白在肺癌中標(biāo)記的MVD平均值是12.45±6.53，在癌旁組織中MVD平均值是0.31±0.46，肺癌組織中SPARC蛋白、TGFβ1蛋白、Endoglin蛋白的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織中的表達(dá)率，差異顯著（P<0.05）。SPARC蛋白與肺癌的臨床分期與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（P均＜0.05

5、），與患者的年齡、性別、腫瘤大小、分化程度及臨床分類無關(guān)（P均>0.05）。TGFβ1蛋白的表達(dá)與肺癌腫瘤大小、臨床分期、和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（P均＜0.05），與患者的年齡、性別、腫瘤分化程度、臨床分類無關(guān)（P均>0.05）。Endoglin蛋白與肺癌的臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（P均＜0.05），與肺癌患者的年齡、性別、腫瘤大小、分化程度、臨床分類無關(guān)（P均>0.05）。SPARC蛋白和TGFβ1蛋白在肺癌組織中表達(dá)具有負(fù)相關(guān)性（r=-0

6、.246，P=0.039）。SPARC蛋白陽性表達(dá)增加時Endoglin標(biāo)記的新生血管密度MVD逐漸減少，而TGFβ1蛋白陽性表達(dá)增加時MVD逐漸增加，SPARC、TGFβ1與MVD均有相關(guān)性（P<0.05）。
　　SPARC mRNA、TGFβ1 mRNA在71例肺癌組織中的陽性表達(dá)率分別為61.97%(44/71)、59.15%(42/71)，30例癌旁肺組織中的陽性率分別為：20%(6/30)、26.67%(8/30)，肺癌

7、組織中SPARC mRNA、TGFβ1 mRNA的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織中的表達(dá)率，差異顯著（P<0.05）。SPARC mRNA在肺癌組織中的表達(dá)與臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（P均<0.05），與年齡、性別、腫瘤大小、分化程度及臨床分類無關(guān)（P均>0.05）。TGFβ1 mRNA在肺癌組織中的表達(dá)與肺癌的腫瘤大小、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P均<0.05），與肺癌患者的年齡、性別、腫瘤分化程度及臨床分類無關(guān)（P均>0.05）。SPA

8、RC mRNA和TGFβ1 mRNA在肺癌中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性（r=-0.356， P=0.002）。肺癌組織中SPARC mRNA的高表達(dá)可以抑制肺癌的進(jìn)展，而TGFβ1 mRNA的高表達(dá)可促進(jìn)肺癌的進(jìn)展，并參與肺癌的轉(zhuǎn)移過程。此二者在肺癌的發(fā)生、發(fā)展中可能起著重要的作用。
　　在71例肺癌組織中，SPARC蛋白陽性表達(dá)的40例標(biāo)本中， SPARC mRNA陽性表達(dá)34例，陰性表達(dá)6例，SPARC蛋白陰性表達(dá)的31例標(biāo)本中，SPA

9、RC mRNA陽性表達(dá)10例，陰性表達(dá)21例，經(jīng)Spearman等級相關(guān)性分析可知SPARC蛋白與SPARC mRNA在肺癌中表達(dá)具有正相關(guān)性（r=0.539，P<0.01）。TGFβ1蛋白陽性表達(dá)的43例標(biāo)本中，TGFβ1 mRNA陽性表達(dá)31例，陰性表達(dá)12例，TGFβ1蛋白陰性表達(dá)的28例標(biāo)本中，TGFβ1 mRNA陽性表達(dá)11例，陰性表達(dá)17例，經(jīng) Spearman等級相關(guān)性分析可知 TGFβ1蛋白與TGFβ1 mRNA在肺癌中

10、表達(dá)具有正相關(guān)性（r=0.326，P<0.01）。說明免疫組化與原位雜交兩種方法具有高度的一致性。
　　(1)SPARC蛋白和SPARC mRNA、TGFβ1蛋白和TGFβ1 mRNA、Endoglin蛋白在肺癌組織中的陽性表達(dá)率顯著高于在癌旁肺組織中的陽性表達(dá)率，提示 SPARC、TGFβ1、Endoglin可能與肺癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)；(2)經(jīng)免疫組化與原位雜交兩種方法檢測：SPARC與肺癌的臨床分期與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)， SPARC

11、在臨床分期早期（Ⅰ~Ⅱ），淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移時表達(dá)增加，而臨床分期越晚（Ⅲ~Ⅳ），淋巴結(jié)出現(xiàn)轉(zhuǎn)移時SPARC的表達(dá)越少，提示SPARC可能抑制肺癌的進(jìn)展，隨著肺癌臨床分期與淋巴結(jié)出現(xiàn)轉(zhuǎn)移時，MVD逐漸增加，而相應(yīng)的SPARC的表達(dá)卻在減少，在臨床早期、淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移時，SPARC表達(dá)增加， MVD卻在減少，二者有相關(guān)性，考慮SPARC在肺癌中的表達(dá)可能與抗腫瘤血管生成有關(guān)；(3)TGFβ1的表達(dá)與肺癌腫瘤大小、臨床分期、和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，隨著肺

12、癌腫瘤體積增大、臨床分期的進(jìn)展及淋巴結(jié)出現(xiàn)轉(zhuǎn)移時TGFβ1的表達(dá)逐漸增加，同時，隨著TGFβ1在肺癌中陽性表達(dá)增多，肺癌腫瘤新生血管數(shù)量也逐漸增多，經(jīng)統(tǒng)計可知TGFβ1與MVD二者具有顯著相關(guān)性，TGFβ1的表達(dá)與肺癌的進(jìn)展和新生血管生成相關(guān)；(4)等級相關(guān)分析顯示SPARC的表達(dá)與TGFβ1的表達(dá)具有負(fù)相關(guān)性，隨著Endoglin標(biāo)記的新生血管密度增加時SPARC在肺癌的表達(dá)減少，而TGFβ1的表達(dá)卻在增加，提示肺癌新生血管可能與SP