中藥復方消瘤平的抗腫瘤作用研究.pdf

1、惡性腫瘤嚴重威脅著人類的生命健康，世界各地惡性腫瘤發(fā)病率及死亡率一直呈上升趨勢，在我國腫瘤死亡分別占城市及農(nóng)村居民死因的第1位和第2位。惡性腫瘤的治療有手術、放療及化療，而化療以合成藥物為主?；熕幰至鲂Ч隙?，但毒副作用廣泛而嚴重，且存在耐藥問題。中藥尤其是中藥復方治療腫瘤系從整體考慮，辯證施治，扶正祛邪，通過提高機體免疫功能而抑制腫瘤。消瘤平(簡稱為XLP)系由靈芝、卷柏、黃芪、白花蛇舌草等組成的中藥復方，符合中醫(yī)治療腫瘤的“扶正固

2、本、軟堅散結、清熱解毒”等治則。作者將該復方的水提液、醇提液及水提醇沉液混合濃縮制成浸膏作為供試品，從整體動物、細胞和分子水平探討了該藥的抗腫瘤作用及其可能的作用機理。 一、XLP對荷瘤小鼠的抑瘤作用 小鼠接種S180腫瘤后隨機分為陰性對照，XLP17、8.5，4.3g/kg組和陽性對照(FT-207，30mg/kg)5組，灌胃給藥12天后，處死取瘤稱重，計算抑瘤率。結果顯示XLP三個劑量組均有抑瘤作用(p＜0.01)。

3、 二、XLP對CTX治療荷瘤小鼠的增效作用 小鼠接種H22瘤液后分為陰性對照、CTX(50mg/kg)、CTX+XLP-L(4.3g/kg)、CTX+XLP-M(8.5g/kg)及CTX+XLP-H(17g/kg)5組。給藥，XLP灌胃每日一次，CTX腹腔注射隔日一次。12天后，處死取瘤稱重。計算抑瘤率。結果合用XLP中、高劑量組對CTX治療H22腫瘤有增效作用(p＜0.01，p＜0.05)。 三、XLP對化療藥

4、治療荷瘤小鼠的減毒作用 小鼠分組、接種S180(或EAC)后分組，給藥12天。眼眶取血，加入白細胞稀釋液，鏡下計數(shù)。比較各組小鼠白細胞數(shù)。結果顯示，XLP4.3g/kg單用可提高荷EAC鼠的白細胞數(shù)(p＜0.05)；XLP中、高劑量(8.5、17g/kg)可抑制FT-207治療荷H22和EAC小鼠所致白細胞降低作用(p＜0.05，p＜0.01)。 四、含XLP血清對腫瘤細胞的抑制作用 大鼠分陽性對照(FT-207

5、)，XLP高、中、低劑量(17、8.5、4.3g/kg)、陰性對照5組，每天灌胃給藥2次。7次后麻醉固定，腹主動脈取血，靜置3h后離心取上清，滅活后過濾除菌。所得血清樣品加入腫瘤細胞中，96孔板中培養(yǎng)48h，加MTT，繼續(xù)培養(yǎng)4h后取出，去上清，加入DMSO溶解，于酶標儀上570nm波長處測OD值；計算抑制率。結果：XLP(8.5g/kg)可以抑制B16細胞的生長(p＜0.01)；XLP(17g/kg)可抑制S180和HepG-2細胞的

6、生長(p＜0.01)；XLP(17、8.5g/kg)可抑制H22和NKM細胞的生長(p＜0.01，p＜0.05)。 五、XLP對荷瘤小鼠巨噬細胞吞噬功能的影響 小鼠分組接種給藥，10天后斷頭放血，取腹腔細胞，洗滌、計數(shù)、重懸，培養(yǎng)皿中孵育24h后消化收集細胞，離心、洗滌、計數(shù)、重懸；加入雞紅細胞，37C水浴30分鐘，離心棄上清，以懸浮細胞涂片，甲醇固定、Gimsa染色，油鏡下數(shù)100個巨噬細胞，計算吞噬百分率及吞噬指數(shù)并

7、作比較。結果：XLP(17、8.5、4.3g/kg)可以增強荷S180小鼠MФ的吞噬率(p＜0.01，p＜0.01，p＜0.05)。 六、XLP對ConA誘導的荷瘤小鼠T細胞增殖反應的影響 小鼠接種分組，給藥10天。無菌取脾制備細胞懸液。96孔板中加細胞懸液20μ1/孔，再加ConA(8μg/ml)。37℃孵育72h。加MTT培養(yǎng)4h，離心棄上清，加DMSO溶解后酶標儀上570nm處測定OD值。結果顯示，XLP三個劑量組

8、小鼠T增殖能力均較對照組增強(均為p＜0.01)。 七、XLP對荷瘤小鼠NK細胞活性的影響 小鼠分組、接種、給藥，取脾制備NK細胞懸液，與K562細胞按50：1比例加入96孔板共孵育4h，棄上清加MTT，孵育4h，去上清，加DMSO溶解后酶標儀上570nm處測OD值，計算各組NK細胞活力并作比較。結果：XLP(17、8.5、4.3g/kg)組荷瘤小鼠NK細胞活性均較陰性組提高(p＜0.01)。 八、XLP對荷瘤小

9、鼠LAK細胞活性的影響 小鼠分組、接種、給藥，制各脾細胞懸液，IL-2(1000U/m1)條件下孵育96h誘導出LAK細胞，與K562細胞按50：1比例加入96孔板共孵育4h，加MTT培養(yǎng)4h，570nm測OD值，計算LAK活力并作比較。結果：XLP(17g/kg，8.5g/kg，4.3g/kg)可以提高荷S180小鼠LAK細胞活性(p＜0.01)。 九、XLP對荷瘤小鼠B細胞功能的影響 小鼠分組、接種、給藥；給

10、藥第5天以5％SRBC0.2ml(i.p)免疫，第11天停藥，取脾制備細胞懸液(5×106/m1)。試管中加入脾細胞、0.2％SRBC懸液及補體稀釋液各1ml，37℃水浴60min；離心取上清，413nm測OD值。結果：XLP(8.5、4.3g/kg)可f強荷S180小鼠B細胞產(chǎn)生抗體能力(p＜0.01)。 十、XLP對荷瘤小鼠脾細胞產(chǎn)生IL-2的影響 小鼠接種、分組、給藥，取脾制備細胞懸液。24孔板中加入脾細胞及Con

11、A(5μg/m1)各1ml,培養(yǎng)24h，離心取上清作為待測樣品。96孔板中加入脾細胞、CTLL-2細胞、樣品(或IL-2標準品)共孵育20h，加入MTT孵育4h，570nm測OD值；以IL-2對數(shù)濃度為橫坐標、OD值為縱坐標作圖，求出標準曲線、回歸方程及各給藥組的IL-2產(chǎn)生量并作比較。結果：XLP(17、8.5g/kg)可增強荷S180小鼠淋巴細胞產(chǎn)生IL-2的能力(p＜0.01)。 十一、XLP對荷瘤小鼠脾細胞產(chǎn)生TNF-α