人參皂苷對復蘇大鼠線粒體功能的作用及實驗模型的選擇.pdf

1、目的：比較3種常用心臟停搏實驗模型--電刺激法、氯化鉀注射法和窒息法的模擬效果及對機體生化環(huán)境與能量代謝的影響；探討人參皂苷對心臟停搏大鼠自主循環(huán)恢復率、復蘇后存活情況、能量代謝及線粒體功能等方面的作用。
　　 方法：實驗共分兩個部分。第一部分為模型比較，成年wistar大鼠共102只，隨機分為3組：電刺激組（n=36）、氯化鉀組（n=44）和窒息組（n=22），分別采用經食道心臟調搏、經頸靜脈注射氯化鉀溶液以及阻斷通氣3種不同

2、方法誘發(fā)心臟停搏（CA）；以上每組根據不同時間點各分為復蘇前和復蘇后2個亞組（總計6個實驗組），復蘇前組處置的時間點為CA后5min、心肺復蘇（CPR）實施前，復蘇后組處置的時間點為恢復自主循環(huán)（ROSC）后即刻。每組動物從誘發(fā)CA出現到開始CPR的間期（非干預間期）統(tǒng)一為5min；CPR措施包括胸外按壓、人工通氣以及靜脈注射腎上腺素（100μg/kg）等。觀察各組動物模型的CA發(fā)生率、CA的心電圖類型、ROSC比率及其前后的生命體征變

3、化（體溫、心率、血壓等）；檢測各組復蘇前后血氣、電解質、血糖及乳酸等指標的變化；此外，使用高效液相色譜法檢測組織磷酸腺苷（AMP、ADP及ATP）的含量并計算能荷（Ec）。第二部分為人參皂苷的作用研究。成年Wistar大鼠870只，隨機分為5組：①腎上腺素組（n=450）、②腎上腺素加山茛菪堿組（n=110，簡稱山莨菪堿組）、③腎上腺素加人參皂苷組（n=160，簡稱人參皂苷組）、④腎上腺素加人參皂苷加山莨菪堿組（n=110，簡稱聯合用藥

4、組）和⑤假手術組（n=40），該組不誘發(fā)CA，不進行CPR等處理。前4組使用電刺激法誘發(fā)CA，非干預間期5min后行CPR（參見第一部分）。以上5組根據ROSC后觀察處置的不同時間又分為ROSC即刻、3h、6h、12h和24h共5個亞組。觀察記錄各組的ROSC率、存活時間、生命體征變化；檢測各組不同時間點的ATP值并計算能荷；使用激光共聚焦顯微鏡及熒光酶標儀檢測各組不同時間點的膜電位和活性氧簇（ROS）水平；電鏡下觀察線粒體形態(tài)學變化并

5、進行計數統(tǒng)計。
　　 結果：第一部分：窒息組的CA發(fā)生率、ROSC率、復蘇前乳酸水平和PCO2均顯著高于其他2組（p<0.05），而復蘇前、后的能荷水平均顯著低于其他2組（p<0.05）；氯化鉀組復蘇前、后的能荷水平及鉀離子濃度均顯著高于其余2組（p<0.05），而CA發(fā)生率顯著低于其余2組（p<0.05）；電刺激組和氯化鉀組誘發(fā)CA的心電圖類型表現多樣，以室顫和室速為主，而窒息組CA的形式主要為無脈電活動或心電靜止。第二部分：

6、人參皂苷組對ROSC率的影響較腎上腺素組無統(tǒng)計學差異（p=0.086）；人參皂苷組、山莨菪堿組和聯合用藥組均可提高大鼠的存活率（p<0.05），但3者之間無統(tǒng)計學差異（p>0.05）；在對能荷、膜電位及活性氧的影響方面，人參皂苷、山莨菪堿以及二者之間的交互效應均有統(tǒng)計學意義（p<0.05），人參皂苷在ROSC后3h能荷顯著高于山莨菪堿組（p<0.05），而在ROSC后即刻～6h之間的膜電位水平則低于山茛菪堿組，與腎上腺素組比較無顯著提高

7、（p>0.05）。聯合用藥組的活性氧水平低于單獨用藥組。電鏡下形態(tài)學觀察結果：人參皂苷在ROSC后3h線粒體形態(tài)即基本恢復正常，并出現功能代償性增強表現；計數結果人參皂苷組在ROSC后3h線粒體壞死的發(fā)生率顯著低于腎上腺素組（p<0.05）。
　　 結論：1.電刺激法模型對大鼠機體生化環(huán)境影響小，CA的心電類型與臨床相符，誘發(fā)CA的發(fā)生率及對機體能量代謝的影響程度介于另2種模型之間，相對較穩(wěn)定，因此綜合效果最佳；2.人參皂苷可顯