外源性調(diào)節(jié)性T細胞減輕小鼠腦出血后炎癥并改善長期神經(jīng)功能預后.pdf

1、目的：
　　1、探討CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞靜脈輸注移植對腦出血小鼠的腦保護作用。
　　2、研究CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞輸注移植后腦出血小鼠腦組織中炎癥細胞因子的變化，并探討CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞在腦出血炎癥反應中的可能保護作用機制。
　　方法：
　　1、免疫磁珠兩步法提取健康成年昆明小鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞。健康雄性昆明小鼠采用自體血注入法建立左側(cè)基底節(jié)區(qū)腦出血模型，實驗動物隨機分

2、為假手術組、腦出血組、PBS對照組（腦出血+與Tregs等體積的PBS靜脈注射）、Tregs治療組（Tregs靜脈注射），PBS、Tregs于模型制作后2小時股靜脈輸注。分別于模型制作前1h和制作后2h測各組小鼠動脈血壓及血氣;血腫掃描并常規(guī)HE染色大體觀察;分別于模型制作后的第1d、3d、7d、14d、21d、28d5個時間點給予行為學評分，觀察神經(jīng)功能缺損;在術后1d、3d、7d干濕重法測定腦組織含水量。
　　2、免疫磁珠兩步

3、法提取健康成年昆明小鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞。健康雄性昆明小鼠采用自體血注入法建立左側(cè)基底節(jié)區(qū)腦出血模型，實驗動物隨機分為假手術組、腦出血組、PBS對照組（腦出血+與Tregs等體積的PBS靜脈注射）、Tregs治療組(Tregs靜脈注射)，PBS、Tregs于模型制作后2小時股靜脈輸注。各組動物于造模后第1d、3d、7d時斷頭取新鮮腦組織，生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定腦組織勻漿液中炎性細胞因子IL-6、TN

4、F-α、IL-1β的表達水平;于造模后第3d時斷頭取腦，制備腦組織石蠟切片，免疫組織熒光方法染色檢測血腫周圍腦組織中炎癥因子IL-6、核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的表達。
　　結(jié)果：
　　1、各組動物術前1小時與術后2小時的動脈血壓及血氣分析結(jié)果無顯著差異。假手術組未見明顯神經(jīng)功能缺損;腦出血組、PBS對照組神經(jīng)行為缺損前三天較重，且第3d時最差，以后逐漸恢復，與假手術組相比，1d、3d、7d、14d、21d時差異均有統(tǒng)計學意義(P

5、＜0.05);與腦出血組、PBS對照組相比，Tregs治療組在1d、3d、7d、14d、21d時功能缺損明顯減輕（P＜0.05），至21d時與假手術組相比較差異已無統(tǒng)計學意義;腦出血組、PBS對照組各時間點差異不明顯。腦出血組、PBS對照組、Tregs治療組腦組織含水量在1d、3d、7d三個時間點均高于假手術對照組(P＜0.05），且第3天時最高;Tregs治療組在第1d、3d、7d時腦組織含水量低于PBS對照組及腦出血組，差異有統(tǒng)計學

6、意義（P＜0.05）;腦出血組與PBS對照組間各時間點差別不顯著。
　　2、腦出血組、PBS對照組及Tregs治療組在1d、3d、7d時腦組織中炎癥因子含量均明顯高于假手術組(P＜0.05)，且第3天時表達最高;在1d、3d、7d時，Tregs治療組炎癥因子含量明顯低于PBS對照組及腦出血組(P＜0.05）。與假手術組相比較，腦出血組、PBS對照組及Tregs治療組血腫周圍腦組織炎癥因子IL-6及核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB3表達在3d時

7、明顯高于假手術組(P＜0.05); Tregs治療組表達量低于腦出血組、PBS對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞靜脈輸注移植可減輕腦出血小鼠腦水腫，改善長期神經(jīng)功能缺損，發(fā)揮腦保護作用。
　　2、CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞靜脈輸注移植可減少腦出血后小鼠血腫周圍腦組織中炎癥因子及核轉(zhuǎn)錄因子的表達，可能通過減輕炎癥反應發(fā)揮腦保護作用，有望通過外源性調(diào)節(jié)性T細胞