肺癌轉(zhuǎn)移相關蛋白（LCMR1）的原核表達、多克隆抗體制備及其應用的初步研究.pdf

1、目的：肺癌轉(zhuǎn)移相關蛋白LCMR1是我們實驗室采用mRNA差異顯示技術克隆到的新基因(GenBankID：AY148462)，本課題擬通過原核表達獲取LCMR1純化融合蛋白質(zhì)，并制備LCMR1抗體，然后在蛋白質(zhì)水平研究LCMR1在多種組織和細胞中的表達，進一步研究該基因的功能。 方法：(1)優(yōu)化pGEX-5T/LCMR1原核質(zhì)粒的表達條件，使之在大腸桿菌系統(tǒng)穩(wěn)定地表達融合蛋白GST-LCMR1，然后應用親和層析技術純化融合蛋白并通

2、過WesternBlot免疫印跡和MALDI-TOF-MS技術對純化的蛋白進行鑒定；(2)通過應用GST-LCMR1蛋白免疫新西蘭兔和免疫原性肽抗體技術兩種不同策略制備LCMR1抗體；(3)應用免疫組織化學技術和組織芯片技術對LCMR1在多種細胞和組織中的表達進行研究。 結(jié)果：(1)確定了LCMR1原核表達的關鍵表達參數(shù)：誘導溫度為20℃、誘導時間為4h及誘導劑IPTG終濃度為0.6mmol/L，使之可以在大腸桿菌中穩(wěn)定表達，并

3、應用谷胱甘肽-瓊脂糖親和層析樹脂成功純化GST-LCMR1蛋白，其純度可達到85％以上；(2)通過將純化的GST-LCMR1融合蛋白免疫新西蘭兔和免疫原性肽抗體技術兩種不同策略成功制備了LCMR1抗體，并證實兩種抗體均有較好的免疫活性和特異性；(3)LCMR1在人正常甲狀腺組織和橫紋肌組織以及卵巢癌組織中低表達，在95C和95D細胞以及在肺、胃、肝臟、心臟、結(jié)腸、食道和前列腺等多種正常和相應腫瘤組織中高表達，而且在95C和95D細胞以及