干擾素-τ調節(jié)妊娠早期奶牛子宮內膜BoLA-Ⅰ機制研究.pdf

1、IFN-τ和BoLA-Ⅰ在奶牛妊娠早期提高母體子宮對胎兒的容受性，提供子宮內免疫抑制環(huán)境，在建立妊娠穩(wěn)定著床等妊娠免疫問題上發(fā)揮了關鍵性作用。IFN-τ是反芻動物的特征性物質，又被定義為抗黃體溶解蛋白，在妊娠早期被胚胎滋養(yǎng)層細胞分泌。由于從IFN-τ出現到消失的時間非常短暫，所以有關IFN-τ在反芻動物妊娠早期的特異性調節(jié)功能還不是很清楚。主要組織相容性復合體(MHC)Ⅰ類抗原在妊娠早期發(fā)揮著在胚胎植入時抑制免疫排斥的作用，在牛被命名為

2、BoLA-Ⅰ。奶牛子宮對胎兒的容受性和BoLA-Ⅰ密切相關。IFN-τ調節(jié)BoLA-Ⅰ的機制尚不明確，妊娠早期母體-胎兒界面的妊娠免疫問題需要研究。
　　本研究確認了胚胎滋養(yǎng)層分泌的IFN-τ通過作用于子宮內膜腔上皮細胞表達BoLA-Ⅰ，進而調節(jié)早期妊娠免疫的潛在機制，主要研究內容和實驗結果如下:
　　(1)為了研究妊娠早期的子宮內膜變化，我們選取妊娠早期9-20天內的三頭奶牛子宮內膜組織進行組織學分析，結果顯示懷孕早期奶牛

3、子宮內膜組織明顯增生變厚，且子宮內膜腔上皮之間的間隙增寬、血管增多，有利于胚胎對子宮內膜的侵襲與附著以及生長和發(fā)育;此際子宮內膜幾乎沒有中性粒細胞以及巨噬細胞的出現，說明子宮為接納胚胎提供了良好的免疫內環(huán)境。為進一步確認妊娠早期子宮內的免疫抑制環(huán)境，我們用ELISA檢測子宮內膜組織中的細胞因子發(fā)現，IL-6表達顯著下降且IL-10表達顯著上升，確證了妊娠早期子宮內膜的免疫抑制環(huán)境。
　　(2)用qPCR和Western blot研

4、究反芻動物妊娠早期標志性物質IFN-τ和妊娠免疫關鍵性物質BoLA-Ⅰ在妊娠早期的變化發(fā)現，妊娠早期相較于未妊娠奶牛子宮內膜組織的IFN-τ和BoLA-Ⅰ的轉錄水平顯著提升高，BoLA-Ⅰ蛋白表達水平亦升高顯著。Western blot檢測轉錄因子TRAF3、STAT1和STAT3的磷酸化水平發(fā)現，STAT1和STAT3磷酸化水平提高，而TRAF3的表達水平降低。
　　(3)運用組織塊培養(yǎng)法和差速貼壁分離技術培養(yǎng)原代子宮內膜腔上皮

5、細胞;通過特異性CK18角蛋白免疫組織化學和激光共聚焦技術鑒定上皮細胞及其純度，傳代后細胞純度＞99％，成功建立子宮內膜腔上皮細胞體外模型。
　　(4)為了驗證IFN-τ對奶牛子宮內膜腔上皮細胞的作用，用不同濃度的IFN-τ處理奶牛子宮內膜腔上皮細胞，驗證以上在妊娠早期子宮內膜組織中檢測的結果發(fā)現，隨著IFN-τ的增加IL-6表達下降，而IL-10表達顯著升高。200ng/mL的IFN-τ顯著上調BoLA-Ⅰ的轉錄水平和蛋白表達。

6、STAT1和STAT3的磷酸化水平隨著IFN-τ處理的濃度的增加而顯著提高，而TRAF3的表達水平隨著IFN-τ濃度增加而顯著降低。IFN-τ處理的奶牛子宮內膜腔上皮細胞與妊娠早期子宮內膜組織的相關物質表達情況一致。
　　結論:IFN-τ有利于妊娠早期奶牛子宮內的胚胎著床，相關機制包括(1)妊娠早期奶牛胚胎滋養(yǎng)層分泌的IFN-τ通過上調IL-10和下調IL-6促進子宮內免疫抑制環(huán)境的形成;(2) IFN-τ增加奶牛子宮內膜腔上皮細