U937巨噬細胞對SW872脂肪細胞糖脂代謝、炎癥細胞因子分泌、增殖及凋亡的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分、SW872前脂肪細胞的誘導分化。 目的:觀察油酸對SW872脂肪細胞的誘導分化作用,分別建立成熟脂肪細胞模型及U937巨噬細胞共培養(yǎng)模型。 方法:采用不同濃度油酸誘導前脂肪細胞成熟分化,光學顯微鏡觀察SW872前脂肪細胞形態(tài)學變化,即細胞內(nèi)脂滴的形成,油紅O染色觀察胞漿中脂滴的聚集,化學比色法測定細胞中甘油三酯的總量。最后與U937巨噬細胞混合培養(yǎng)。 結(jié)果: 1.油酸誘導分化24h時,SW872

2、細胞胞體由小變大,形態(tài)由梭形變?yōu)閳A形,胞漿中出現(xiàn)細小的脂滴;誘導分化48h時,細胞體積進一步變大,幾乎所有細胞形態(tài)變圓,胞漿中脂滴明顯增多;誘導分化72h時,細胞呈戒環(huán)狀,胞漿脂滴含量更多,油紅O染色胞漿中可見豐富的脂肪染色。 2.油酸誘導分化刺激24h時,細胞中甘油三酯總量增多;0.6mM誘導分化刺激48h時,甘油三酯總量是分化前的8.5倍(p<0.01);誘導分化刺激72h時,甘油三酯總量是分化前的14倍(p<0.01)。隨

3、著油酸誘導濃度的升高,細胞中甘油三酯含量增加也更加迅速。 結(jié)論:油酸刺激能成功地將SW872前脂肪細胞誘導分化為典型的成熟脂肪細胞。 第二部分、U937巨噬細胞共培養(yǎng)對SW872糖脂代謝及炎癥狀態(tài)的影響。 目的:觀察U937巨噬細胞與SW872脂肪細胞共培養(yǎng)對脂肪細胞葡萄糖轉(zhuǎn)運和其炎癥因子分泌水平的影響,探討炎癥狀態(tài)與脂肪細胞胰島素抵抗的關系及其機制。 方法: 1.采用[3H]-2-DG摻入法,觀

4、察基礎狀態(tài)及胰島素刺激下,不同油酸濃度及巨噬細胞混合培養(yǎng)對SW872脂肪細胞葡萄糖攝取率的影響。 2.采用RT-PCR方法,測定不同油酸濃度及巨噬細胞混合配額樣對SW872脂肪細胞和巨噬細胞TNF-α、MCP-1、Visfatin基因表達水平的影響。 3.采用ELISE方法,測定不同油酸濃度及巨噬細胞混合配額樣對SW872脂肪細胞和巨噬細胞TNF-α、MCP-1、Visfatin分泌水平的影響。 結(jié)果:油酸誘導濃

5、度0mmol/L至0.6mmol/L時,脂肪細胞葡萄糖攝取率呈升高趨勢,0.8至1.2mmol/L時葡萄糖攝取率逐漸下降,但隨著油酸誘導濃度的增加,TNF-α、MCP-1分泌及Visfatin基因表達水平均明顯升高。在與巨噬細胞混合培養(yǎng)后,TNF-α、MCP-1分泌Visfatin基因表達水平進一步升高,而各組葡萄糖攝取率均受到抑制。同時巨噬細胞在混合培養(yǎng)前后,其自身炎癥狀態(tài)也同時升高。 結(jié)論:油酸誘導SW872前脂肪細胞成熟分

6、化,在高脂負荷下,不但造成了胰島素抵抗,而且導致炎癥因子水平急劇升高,巨噬細胞的趨化加重了脂肪細胞炎癥狀態(tài)負荷,進一步抑制了葡萄糖攝取,削弱胰島素敏感性。 第三部分、U937巨噬細胞共培養(yǎng)對SW872增殖及凋亡的影響。 目的:觀察U937巨噬細胞與SW872脂肪細胞共培養(yǎng)狀態(tài)下,對脂肪細胞增殖及凋亡的影響,探討巨噬細胞在脂肪細胞胰島素抵抗形成中的意義。 方法: 1.利用四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT)檢測U

7、937巨噬細胞對SW872前脂肪細胞增殖的影響, 2.采用流式細胞學(FCM)手段檢測各組脂肪細胞在不同炎性反應狀態(tài)下對細胞凋亡的影響。 結(jié)果:隨著油酸誘導濃度的增加及SW872前脂肪細胞分化成熟,脂肪細胞凋亡率亦逐漸增加(P<0.05);在與U937巨噬細胞混合培養(yǎng)后,炎癥狀態(tài)改變對各脂肪細胞組混合培養(yǎng)前后的凋亡率無明顯影響(P>0.05);U937巨噬細胞的混合培養(yǎng)對SW872前脂肪細胞的增殖率有明顯抑制作用(P<0

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