原發(fā)性高血壓患者血清中抗AT-,1-受體自身抗體的生物學(xué)效應(yīng)及其產(chǎn)生機(jī)制研究.pdf

1、本研究分為三部分：
　　 第一部分：原發(fā)性高血壓患者中抗AT1受體自身抗體刺激大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖及胞內(nèi)信號(hào)分子研究
　　 背景及目的：在妊高征和惡性高血壓患者血清中檢測(cè)到抗血管緊張素Ⅱ 1型受體自身抗體（AT1-AA）的存在，同時(shí)有研究表明該自身抗體有類似血管緊張素Ⅱ（Ang Ⅱ）的激動(dòng)樣作用并參與高血壓免疫發(fā)病機(jī)制形成。在此我們將進(jìn)一步闡述該自身抗體其激動(dòng)樣效應(yīng)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)機(jī)制。
　　 方法：大鼠主動(dòng)脈細(xì)

2、胞培養(yǎng)及鑒定。同時(shí)將收集原發(fā)性高血壓病人血清經(jīng)硫酸銨沉淀粗提、免疫親和層析法純化，ELISA檢測(cè)其滴度后以1:40刺激細(xì)胞，并設(shè)立不同的處理組用BrdU法觀察細(xì)胞增殖情況。經(jīng)Western 印跡方法和電泳遷移率變動(dòng)分析胞內(nèi)信號(hào)分子激活及表達(dá)狀況。
　　 結(jié)果：在0～24h的平滑肌細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)中，AT1-AA組有類似于AngII的作用。Western 及EMSA顯示AT1-AA組中NF-κB和磷酸化的JAK2、STAT1和STAT

3、3水平分別較空白對(duì)照組明顯增強(qiáng)，而表達(dá)可相應(yīng)被PDTC（NF-κB拮抗劑）、AT1受體阻滯劑Losartan和JAK2特異性拮抗劑AG490明顯抑制。同時(shí)，NF-κB和磷酸化的STAT1和STAT3表達(dá)分別在不同的時(shí)間梯度達(dá)高峰，且磷酸化STAT3的活化較STAT1更為明顯。
　　 結(jié)論：高血壓病人血清中AT1-AA確有類似血管緊張素Ⅱ致平滑肌細(xì)胞增殖激動(dòng)樣效應(yīng)，并且在該效應(yīng)中伴有NF-κB、JAK-STAT信號(hào)通路的活化。且不

4、同于AngII的是，胞內(nèi)JAK-STAT途徑中以STAT3活化為主。
　　 第二部分：原發(fā)性高血壓患者中抗AT1受體自身抗體產(chǎn)生與 HLA基因多態(tài)性間的關(guān)聯(lián)性研究
　　 背景及目的：在妊高征、惡性高血壓和原發(fā)性高血壓患者血清中都可檢測(cè)到抗血管緊張素Ⅱ 1型受體自身抗體（AT1-AA）的存在，然而其產(chǎn)生機(jī)制至今研究的甚少。本文主要分析其與免疫基因HLA多態(tài)性間的關(guān)聯(lián)。
　　 方法：入選394例原發(fā)性高血壓病人和22

5、4例正常血壓健康體檢者，并通過(guò)ELISA檢測(cè)自身抗體滴度。我們收集入選者一般臨床資料，包括性別、年齡、體重指數(shù)、血壓、吸煙及糖尿病情況。高血壓和正常對(duì)照組分別按抗體陰性和陽(yáng)性進(jìn)行分組。通過(guò)PCR序列特異性引物法（PCR-SSP）進(jìn)行HLA基因分型。
　　 結(jié)果：13種HLA-DRB1基因型和7種HLA-DQB1基因型被檢測(cè)。結(jié)果表明不同的HLA-DRB1和HLA-DQB1基因型在原發(fā)性高血壓和正常人群中表達(dá)頻率不同，且單倍型HL

6、A-DQB1*06-DRB1*13是原發(fā)性高血壓形成的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（校正后P=0.014，OR 3.138，95% CI 1.259-7.819）。正常血壓者中HLA-DRB1*04和HLA-DRB1*14基因型與AT1-AA產(chǎn)生關(guān)聯(lián)（分別P=0.001，OR 3.056，95%CI 1.562-5.974；P=0.033，OR 2.528，95%CI 1.080-5.914），同時(shí)高血壓患者中基因型HLA-DRB1*04也與AT1-A

7、A產(chǎn)生相關(guān)，以P<0.1為檢驗(yàn)水準(zhǔn)則其P值經(jīng)校正后仍存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（校正后P=0.07，OR 1.629，95% CI 0.954-2.780）。
　　 結(jié)論：上述結(jié)果表明高血壓患者和正常人血清中自身抗體形成具有不同的免疫遺傳背景，同時(shí)闡明了環(huán)境因素血壓和基因易感因素HLA-DRB1*04等位基因型與AT1-AA產(chǎn)生密切相關(guān)。
　　 第三部分：抗AT1受體自身抗體與其受體基因AGTR1多態(tài)性的關(guān)聯(lián)研究、及兩者對(duì)藥物Can

8、desartan降壓效應(yīng)的影響
　　 背景及目的：不同的個(gè)體對(duì)降壓藥AT1受體拮抗劑（ARB）的反應(yīng)存在較大的差異，同時(shí)AT1-AA在高血壓的發(fā)生法發(fā)展中起到重要的作用，因此我的目的研究其降壓個(gè)體差異產(chǎn)生的原因即降壓效應(yīng)與AT受體基因AGTR1多態(tài)性、AT受體自身抗體間11的是否存在一定的關(guān)聯(lián)性。
　　 方法：隨機(jī)選取175名原發(fā)性高血壓患者進(jìn)行為期8周的Candesartan臨床試驗(yàn)，并進(jìn)行AT1-AA陽(yáng)性和陰性分組。

9、收集其血樣標(biāo)本進(jìn)行DNA提取并通過(guò)直接測(cè)序法對(duì)AGTR1基因中三個(gè)SNP位點(diǎn)rs1492078、rs5186和 rs380400進(jìn)行分型。通過(guò)ELISA法檢測(cè)AT1-AA滴度。
　　 結(jié)果：結(jié)果顯示Candesartan治療后抗體陽(yáng)性組和陰性組間舒張壓下降程度無(wú)明顯差異，而收縮壓的下降抗體陽(yáng)性組顯著多于抗體陰性組(P=0.014，校正后P=0.050)。在抗體陰陽(yáng)性分組后檢測(cè)到單倍型[GAC]與AT1-AA的產(chǎn)生負(fù)相關(guān)（校正后P

10、=0.028 OR 0.342，95% CI 0.131-0.890），而三個(gè)SNP位點(diǎn)中單個(gè)點(diǎn)基因型與其自身抗體頻率間無(wú)相關(guān)性。校正了年齡、性別和自身抗體對(duì)降壓藥物的影響后，rs5186(A/C)和單倍型 [GCC] 能顯著增強(qiáng)Candesartan降收縮壓效應(yīng)(校正后分別 P=0.028和 P=0.026)，而單倍型 [AAC]則顯示能增強(qiáng)Candesartan降舒張壓效應(yīng)(校正后 P=0.016)。
　　 結(jié)論：AT1-A