慢病毒介導的RNAi沉默TLR4基因對人肝癌裸鼠移植瘤生長的影響.pdf

1、目的:
　　探討TLR4基因RNA干擾(RNAi)的重組慢病毒載體對人肝癌裸鼠移植瘤TLR4基因表達和移植瘤生長的影響。
　　方法:
　　1、構建1個陰性對照質粒和2個miR-TLR4質粒,選擇干擾效果最明顯的質粒進行慢病毒包裝用于裸鼠移植瘤實驗。
　　2、建立人肝癌裸鼠移植瘤模型,隨機分成實驗組、陰性對照組和空白對照組。隔天1次向各組動物移植瘤內分別注射TLR4 miRNA慢病毒顆粒、攜帶無關序列的慢病毒顆?；?/p>

2、0.9％氯化鈉溶液0.2ml,共5次,且注射前測量各組移植瘤體積的大小,并繪制裸鼠移植瘤生長曲線;11天后處死裸鼠,將瘤體稱重并計算抑瘤率,并應用半定量反轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)和Western bolt技術檢測移植瘤中TLR4基因的表達。
　　結果:
　　Western bolt檢測干擾效率顯示,轉染干擾片段1、2及陰性對照片段與對照組相比,轉染干擾片段1后,TLR4蛋白表達量顯著減少,即干擾片段1干擾效果最明顯

3、(P<0.05)。故將干擾片段1和陰性對照片段進行慢病毒包裝。繪制裸鼠移植瘤生長曲線顯示,與空白對照組和陰性對照組相比,實驗組移植瘤生長速度明顯減慢(P<0.05);空白對照組和陰性對照組相比,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。空白對照組和陰性對照組剝脫的瘤體瘤重分別為(2.32±0.03)g和(2.26±0.02)g,而實驗組剝脫的瘤體瘤重為(0.95±0.02)g,實驗組瘤體瘤重顯著低于空白對照組和陰性對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<