超選擇性冠狀動(dòng)脈內(nèi)臍帶血單個(gè)核細(xì)胞移植治療冠心病的初步研究.pdf

1、背景：冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。–AD)指冠狀動(dòng)脈粥樣硬化使血管腔狹窄或阻塞，或因冠狀動(dòng)脈功能性改變（痙攣）導(dǎo)致心肌缺血缺氧或壞死而引起的心臟病，統(tǒng)稱冠狀動(dòng)脈性心臟?。–HD），簡(jiǎn)稱冠心病，亦稱缺血性心臟?。↖schemic heart disease)。缺血性心肌病(ICM)是心肌供血長(zhǎng)期不足，致散在性心肌纖維化或心肌梗死后心肌缺血區(qū)域由纖維瘢痕所替代，臨床表現(xiàn)以心力衰竭（heart failure)和(或)心律失常(cardiac

2、arrhythmia)為主。目前 ICM治療方法有藥物治療，冠脈搭橋術(shù)(CABG)或和皮腔內(nèi)介入成形術(shù)（PTCA)。但部分患者因冠脈病變嚴(yán)重?zé)oCABG或PTCA指針，且藥物治療效果差。近年來(lái)崛起的多種干細(xì)胞移植療法為這一部分患者的治療提供了嶄新的方法和希望，也成為各國(guó)學(xué)者研究的熱點(diǎn)。大量基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究表明，干細(xì)胞能夠改善受損心肌的灌注和收縮功能。本文即通過(guò)應(yīng)用臍帶血干細(xì)胞移植治療冠心病進(jìn)行臨床研究。
　　目的:探討超選擇性冠狀動(dòng)脈內(nèi)

3、人臍帶血單個(gè)核細(xì)胞移植治療冠心病的可行性，安全性及有效性，探討其機(jī)制。
　　方法:
　　1.臍帶血單個(gè)核細(xì)胞的分離及提取：所有臍帶血均來(lái)自貴州省人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，采自無(wú)妊娠并發(fā)癥，身體健康，新生兒足月分娩（37-40周）孕婦。捐獻(xiàn)者自愿捐獻(xiàn)，且同意用于科學(xué)研究和臨床治療。一次性血袋采集臍血80－120 mL，6 h內(nèi)分離，采用60 g/L羥乙基淀粉沉淀及1.077 g/L ficoll-paque密度梯度離心兩步分離法，吸取中

4、間含單個(gè)核細(xì)胞的白膜層，PBS洗2次。移植前將細(xì)胞置于含10μmol/L BrdU、體積分?jǐn)?shù)為0.1胎牛血清的L-DMEM培養(yǎng)基中，在37℃、體積分?jǐn)?shù)為0.05的CO2飽和濕度細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育24 h。
　　2.選擇經(jīng)冠脈造影明確診斷為多支彌漫病變的冠心病患者10例，常規(guī)消毒鋪，2％利多卡因局部麻醉，橈動(dòng)脈穿刺建鞘，通過(guò)指引導(dǎo)管經(jīng)鋼絲ATM（日本醫(yī)療器械公司泰爾茂Terumo Corp）將非快速交換球囊(over-the-wier)

5、（強(qiáng)生 cordis公司）超選擇到靶血管，退出鋼絲，4-6atm充盈球囊，經(jīng)球囊中央孔將5mL臍帶血單個(gè)核細(xì)胞緩慢灌注3分鐘至靶血管。全程監(jiān)測(cè)心電、血壓，于術(shù)前、術(shù)后1周，術(shù)后3月抽取外周靜脈血檢測(cè)肝腎功、肌鈣蛋白T（TnT）、NO、VEGF、BNP，細(xì)胞免疫學(xué)檢查等變化，術(shù)前及術(shù)后1周,術(shù)后3月行動(dòng)態(tài)心電圖、超聲心動(dòng)圖，6分鐘步行實(shí)驗(yàn)等檢查，并記錄患者其它不良反應(yīng)及心血管事件發(fā)生情況。
　　結(jié)果:
　　1.所有患者均成功完

6、成手術(shù)，手術(shù)時(shí)間平均為(12±2.58）分，放射照射時(shí)間（8±3.14）分，術(shù)中及術(shù)后患者心率血壓均在正常范圍內(nèi)。
　　2.心功能檢測(cè)
　　2.1術(shù)前及術(shù)后1周患者心功能無(wú)明顯變化，術(shù)前，術(shù)后1周與術(shù)后3月相比較：心功能II，III級(jí)患者分別為2例，8例，術(shù)后3月II，III級(jí)分別為7例，3例，表明術(shù)后患者心功能改善。
　　2.2臍帶血單個(gè)核細(xì)胞移植術(shù)后3月，LVEF，6-MWT(m)顯著增加，LVDd(mm)顯著減小

7、。術(shù)前，術(shù)后1周，術(shù)后3月LA無(wú)明顯變化。
　　2.3臍帶血單個(gè)核細(xì)胞移植術(shù)后1周，外周靜脈血NO及VEGF顯著升高，術(shù)后3月，BNP顯著降低，NO及VEGF進(jìn)一步顯著升高。
　　2.4臍帶血單個(gè)核細(xì)胞移植后1周，心律失常評(píng)分顯著降低，術(shù)后3月心律失常評(píng)分進(jìn)一步顯著降低。
　　3.術(shù)前，術(shù)后1周，術(shù)后3月肝腎功能，主要檢測(cè)指標(biāo)為（AST，ALT，CREA，BUN）,TnT等無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.

8、術(shù)前，術(shù)后1周，術(shù)后3月細(xì)胞免疫學(xué)檢查：主要指標(biāo)為CD3(T)%,CD4(Th)%,CD8(Ts)%,CD4/CD8,(T+B+NK)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5.移植術(shù)中，術(shù)后1周，術(shù)后3月患者未出現(xiàn)發(fā)熱，全身不適，精神萎靡，食欲減退，惡心嘔吐，皮疹，頭痛等臨床癥狀，未出現(xiàn)惡性心律失常及急性心力衰竭發(fā)生，未出現(xiàn)死亡病例。
　　結(jié)論：超選擇性冠狀動(dòng)脈內(nèi)臍帶血單個(gè)核細(xì)胞移植治療冠心病是一種安全可行的方法，可能通過(guò)促進(jìn)機(jī)體NO，