神經干細胞移植對豚鼠順鉑毒性耳蝸的保護作用.pdf

1、授予單位代碼學號或申請?zhí)柮?級鄭州大學碩士學位論文論文題目：作者姓名：學科門類：專業(yè)名稱：導師姓名、職稱：10 4 5 90 3 3 4 1 4 2 3神經干細胞移植對豚鼠順鉑毒性耳蝸的保護作用趙春紅醫(yī) 學耳鼻咽喉科學董明敏教授2 0 0 6 年5 月1 2 日鄭州大學2 0 0 6 年碩士畢業(yè)論文 神經干細胞移植對豚鼠順鉑毒性耳蝸的保護作用量顯著提高，且導致N G F 、B D N F 顯著提高，G D N F 產量減少到不可檢測水平

2、。神經營養(yǎng)因子在干細胞的表達是動態(tài)調控的，可能受分化狀態(tài)的影響，并被細胞內其他營養(yǎng)因子的產量進一步影響。目前，一種不明確的復雜的相互作用可能存在于營養(yǎng)因子信號轉導通路。本實驗通過耳蝸底轉N s c s 移植觀察對順鉑毒性耳蝸的保護作用；細胞移植組加用N G F 注射液和單純細胞移植組相比較觀察移植細胞在耳蝸的分布情況和神經營養(yǎng)因子N T ．3 在耳蝸的表達情況，從而評價N G F 對N s c s 遷移和耳蝸表達N T ．3 的影響。材

3、料與方法本實驗分兩部分。第一部分：細胞培養(yǎng)從新生豚鼠( 2 4 h ) 海馬組織中機械分離得到N S c s 懸液，對其進行傳代和誘導分化培養(yǎng)，倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞形態(tài)。傳代細胞用N e s t i n 免疫細胞化學染色鑒定所培養(yǎng)細胞為N S C s ；誘導分化細胞分別用N s E 、G F A P 免疫細胞化學染色鑒定N s c s 主要誘導分化為神經元和星形膠質細胞；并用B r d U 標記N S C s 以備移植用。第二部分

4、：動物實驗選用健康、耳廓反應靈敏、無中耳感染、A B R 測試雙耳聽力在2 0 ～3 0 d B 、體重2 0 0 ～3 0 0 克純白紅目豚鼠4 8 只作為實驗動物。隨機分為血組。I 組：空白對照組。1 2 只( 2 4 耳) ，不施加任何處理因素。4 只用于A B R 閾值測試、耳蝸基底膜鋪片硝酸銀染色等觀察指標的正常對照；4 只用于石蠟切片免疫組化染色觀察正常耳蝸組織中N T 一3 的表達情況；4 只用于R T —P c R 檢測

5、N T 一3m R N A 在正常耳蝸的表達情況。l I 組：單純耳蝸底轉打孔組。8 只( 1 6 耳) ，僅施以耳蝸底轉骨壁打孔術，不致聾、不注射N s c s 。分別于術前及術后第7 天、1 4 天測A B R ，‘觀察手術操作對聽力的影響，以及通過耳蝸基底膜鋪片硝酸銀染色觀察手術操作對聽毛細胞的損傷。I I I 組：致聾后耳蝸底轉注射生理鹽水組。1 2 只( 2 4 耳) ，術后4 周處死， 4 只用于耳蝸基底膜鋪片硝酸銀染色觀察

6、順鉑對聽毛細胞的損傷；4 只用于石蠟切片免疫組化染色觀察耳蝸組織中N T 一3 的表達情況；4 只用于R T —P c R 檢測N T 一3 m R N A 在耳蝸的表達情況。Ⅳ組：致聾后耳蝸底轉打孔注N s c s 組。8 只( 1 6 耳) ，經耳蝸底轉骨壁打孔向內耳注入B r d U 標記的N s c s ，術后4 周處死，4 只用于石蠟切片B r d u 免疫組化染色觀察移植細胞在耳蝸的存活分布以及耳蝸組織N T 一3 的表達情