番茄抗灰霉病相關(guān)基因SNP標(biāo)記的開發(fā)與應(yīng)用.pdf

1、番茄作為重要的蔬菜栽培作物之一，被世界各地廣泛種植，其獨(dú)特的風(fēng)味和豐富的營(yíng)養(yǎng)為廣大消費(fèi)者所喜愛(ài)。隨著栽培面積的擴(kuò)大，灰霉病作為主要病害之一，嚴(yán)重危害了番茄的正常生長(zhǎng)，培育優(yōu)良的具有穩(wěn)定的抗灰霉病病遺傳特性的番茄品種已經(jīng)成為亟需解決的問(wèn)題。常規(guī)田間抗病番茄育種耗時(shí)長(zhǎng)，性狀難以穩(wěn)定遺傳，而分子標(biāo)記輔助選擇育種周期短，效率高，為育種工作者加速了育種進(jìn)程，成為培育新品種的首選手段。
　　本研究旨在通過(guò)利用生物信息學(xué)方法，對(duì)重測(cè)序的300多

2、份番茄材料篩選出灰霉病相關(guān)抗病基因的核苷酸差異位點(diǎn)，開發(fā)出具有多重抗病基因的SNP分子標(biāo)記運(yùn)用于基因標(biāo)記輔助選擇育種，為番茄抗灰霉病的品種選育提供新的材料，加快抗病番茄的育種進(jìn)程。本研究所獲成果如下：
　　1.根據(jù)300多份番茄材料重測(cè)序獲得10個(gè)位點(diǎn)，每個(gè)位點(diǎn)選取1個(gè)最相關(guān)的SNP，從Heinz上找到番茄基因組中此SNP位點(diǎn)前后1000bp的序列信息，在此段序列上設(shè)計(jì)引物，其中一條前引物或后引物的3’端與模板互補(bǔ)或錯(cuò)配，并通過(guò)修

3、改設(shè)計(jì)人為的在3’端的第二位或第三位引入錯(cuò)配堿基以提高此引物的特異性。據(jù)此一共設(shè)計(jì)了分布在三條不同染色體上的多個(gè)抗灰霉病相關(guān)SNP標(biāo)記，保證10個(gè)位點(diǎn)中每個(gè)SNP位點(diǎn)有一對(duì)以上的單組可用引物。
　　2.由于10個(gè)SNP位點(diǎn)分布于三條不同的染色體上，據(jù)此設(shè)計(jì)三組多重SNP標(biāo)記混合引物：第1、2、3、4個(gè)SNP位點(diǎn)位于1號(hào)染色體上，第5、6、7、8個(gè)SNP位點(diǎn)位于3號(hào)染色體上，第9、10個(gè)SNP位點(diǎn)位于6號(hào)染色體上，達(dá)到一次PCR反應(yīng)