GDF-5與兔椎間盤體外模型聯合誘導兔BMSCs向類髓核細胞分化的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：探討GDF-5與兔椎間盤體外模型聯合誘導兔BMSCs向類髓核細胞分化的可行性，為下一步GDF-5轉染兔BMSCs聯合支架材料注入活體兔椎間盤模型奠定實驗基礎。
　　 方法：采用全骨髓細胞貼壁分離法培養(yǎng)兔骨髓間充質干細胞，倒置相差顯微鏡觀察BMSCs形態(tài)，CD44、CD54免疫組化染色鑒定，PI染色測細胞周期，CCK-8檢測P3、P5、P7細胞增殖，檢測P3、P5、P7細胞貼壁率，RT-PCR檢測細胞二型膠原、蛋白多糖、MM

2、P1、MMP2、ADAMTs-5基因表達。分別用普通培養(yǎng)基、含100ng/mlGDF-5的培養(yǎng)基、含100ng/mlGDF-5的培養(yǎng)基聯合兔椎間盤體外模型，培養(yǎng)骨髓間充質干細胞。PI染色檢測細胞周期；CCK-8檢測細胞增殖；二型膠原免疫組化、阿利新蘭染色、甲苯胺藍染色檢測二型膠原和蛋白多糖表達。
　　 結果：BMSCs形態(tài)呈梭形、紡錘形或多角形，境界清楚，表面抗原標志物CD44、CD54免疫組化染色陽性，PI染色細胞周期顯示細胞

3、主要處于G0/G1期，P3、P5、P7代細胞增殖及貼壁率有衰減趨勢。BMSCs不表達二型膠原和蛋白多糖基因，表達MMP1、MMP2、ADAMTs-5基因。分別培養(yǎng)后，含100ng/mlGDF-5的培養(yǎng)基聯合椎間盤體外模型組，細胞形態(tài)變大變圓。含100ng/mlGDF-5的培養(yǎng)基明顯促進細胞增殖，S期細胞數顯著增多，Ⅱ型膠原免疫組化、阿利新蘭染色、甲苯胺藍染色：陰性。含100ng/mlGDF-5的培養(yǎng)基聯合椎間盤體外模型組，細胞增殖初期顯

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