來源于骨髓間充質干細胞和造血干細胞的成骨細胞性質的研究.pdf

1、目的 1 來源于骨髓的間充質干細胞可以向成骨細胞定向分化,檢測在體外分離培養(yǎng)間充質干細胞成骨誘導后細胞的性質,探討不同誘導時間后細胞的性質并與來源于正常人松質骨成骨細胞進行比較.2 骨髓中含有造血和間充質兩種干細胞系統(tǒng),探討骨髓中兩種干細胞功能的交叉性.方法 1采用Ficoll分離骨髓中的間充質干細胞,體外擴增,流式細胞儀檢測細胞表面抗原的表達.在DMEM/F12培養(yǎng)基中加入地塞米松、β-磷酸甘油、抗壞血酸(稱為OS培養(yǎng)基)定向誘導MS

2、C分化為成骨細胞,觀察細胞形態(tài),用堿性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型膠原、骨鈣素(OCN)染色來鑒定成骨細胞功能,同時用不同濃度的BMP-2和DEX刺激細胞來觀察誘導7天、14天的成骨細胞的性質并和來源于人松質骨的成骨細胞進行比較.2 采用MACS CD34+細胞分離系統(tǒng)分離骨髓,流式細胞儀檢測分離骨髓CD34+的純度.分離純化的CD34+細胞在OS培養(yǎng)基中誘導培養(yǎng)并進行成骨細胞功能鑒定.結果 1 流式細胞儀檢測結果,體外分離的MSC可表達CD

3、29、CD105,弱表達Stro-1,不表達CD34.誘導培養(yǎng)后細胞形態(tài)由纖維狀變成多角形,ALP、Ⅰ型膠原、骨鈣素染色呈陽性.體外誘導分化14天的成骨樣細胞比誘導7天的細胞更加成熟,但其成骨能力比正常的成骨細胞成骨能力要弱.2 MACS分離系統(tǒng)分離骨髓CD34+細胞后純度達95％,分離效果較好,CD34+細胞直接培養(yǎng)可獲得貼壁細胞.但CD34+細胞體外擴增潛能較小.CD34+細胞誘導培養(yǎng)7天后可以檢測到成骨細胞的標志即ALP、Ⅰ型膠原