纈沙坦對早期糖尿病大鼠腎臟及JNK信號傳導通路的影響.pdf

1、目的:糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(diabetesreellitus,DM)最常見、最嚴重的慢性并發(fā)癥之一。C-Jun氨基末端激酶(c-JunN-terminal Kinase,JNK)信號傳導通路能被多種因素激活,如細胞因子、環(huán)境應激等,激活的JNK信號通路參與了多種生命過程,如細胞分化、細胞調亡等[1]。糖尿病狀態(tài)下,糖代謝異常、各種細胞因子的作用以及腎臟血流動力學改變均可引起腎臟細胞內信號

2、轉導通路發(fā)生改變,在一定程度上導致和加速了DN的發(fā)生及發(fā)展。研究表明,腎素一血管緊張素系統(tǒng),尤其是血管緊張素Ⅱ在DN的發(fā)生和進展中發(fā)揮重要作用。本課題通過動物實驗檢測糖尿病大鼠腎組織中MKK7、JNK、c-Jun及p-JNK的表達和腎組織細胞凋亡程度;探討JNK信號傳導通路在糖尿病大鼠腎組織損害中的作用;研究血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑纈沙坦對糖尿病大鼠腎損害的影響及可能的機制。
　　 方法:
　　 清潔級雄性Wistar大鼠

3、45只,隨機分為3組:正常對照組(normalcontrol group,NC組,10只)、糖尿病組(diabetic model group,DM組)及纈沙坦組(diabetic model group with valsartan treatment,Val組,兩組共35只)。DM組及Val組大鼠禁食12小時后,空腹狀態(tài)下按60mg/kg給予STZ腹腔注射,對照組腹腔注入等量檸檬酸緩沖液。72h后測隨機血糖兩次≥16.7mmol/L

4、為DM建模成功,共34只,不合格1只棄去,分各組17只。Val組給予纈沙坦10mg/kg/d灌胃,DM組及NC組喂以等量飲用水,共治療8周。實驗期間大鼠自由飲水、進食,不使用其他藥物。第4周末各組隨機選擇處理一半大鼠,余下大鼠8周末時處理,稱大鼠體重及腎重,留取血、尿標本分別測定血糖(BG)、血白蛋白(ALB)、血肌酐(Scr)、血甘油三酯(TG)、血膽固醇(CHO)、高密度脂蛋白(HDL),低密度脂蛋白(LDL)、尿素氮(BUN)、尿

5、酸(UA)及24小時尿蛋白定量,計算大鼠腎臟肥大指數(KW/BW)。免疫組織化學法定位檢測腎組織JNK、p-JNK及c-Jun的表達;Western blotting技術半定量檢測MKK7、JNK、p-JNK及c-Jun蛋白在腎組織表達水平;流式細胞儀檢測腎組織細胞凋亡程度。所有實驗數據采用均數±標準差(-x±S)表示,組間比較采用方差分析,在SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件上進行。
　　 結果:
　　 1：各組BG、體重、

6、腎重KW/BW及尿蛋白定量結果:DM組大鼠與NC組比較,BG升高、體重下降、腎重增加、KW/BW升高、尿蛋白定量增加,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。Val組大鼠與DM組比較,24h尿蛋白定量降低,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 2：免疫組化:4周末及8周末NC組大鼠腎小球、腎小管及腎間質都有少量的JNK、c-Jun及p-JNK表達。4周末DM組大鼠腎小球、腎小管及腎間質中JNK、c-Jun及p-JNK表達增加,以腎

7、小管胞漿及腎間質表達增多更顯著,較NC組差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);8周末DM組大鼠腎組織中JNK、c-Jun及p-JNK腎小管胞漿、腎間質及部分腎小球表達增多更明顯,較NC組差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。4周末Val組大鼠與相應DM組比,差異無統(tǒng)計學意義;8周末Val組大鼠與相應DM組比較,腎組織中JNK、c-Jun及p-JNK表達降低,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 3：Western blotting:

8、8周末DM組大鼠腎組織MKK7、JNK、c-Jun及p-JNK表達與4周末DM組相應指標比較,蛋白表達增加,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);8周末Val組大鼠腎組織p-JNK蛋白表達與4周末Val組相應指標比較,表達增加,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);而JNK及c-Jun差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。4周末與8周末DM組及Val組大鼠腎組織各因子蛋白表達較NC組大鼠相應指標明顯升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。8周

9、末Val組大鼠腎組織各指標蛋白表達與8周末DM組相比均有所降低,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。4周末NC組與8周末NC組之間沒有明顯差異(P＞0.05)。
　　 4：DM組腎組織細胞凋亡指數明顯高于NC組,Val組細胞凋亡指數明顯低于DM組。腎組織中MKK7、JNK、c-Jun及p-JNK的表達與腎組織細胞凋亡呈正相關。
　　 結論:
　　 糖尿病時腎組織中MKK7、JNK、c-Jun及p-JNK的表達上調,